suspensi 25 %

PENENTUAN ANGKA LEMPENG TOTAL (ALT)

PENENTUAN ANGKA LEMPENG TOTAL (ALT) 

ilmu PENENTUAN ANGKA LEMPENG TOTAL (ALT)

BAB I
PENENTUAN ANGKA LEMPENG TOTAL (ALT)
Metode penentuan angka lempeng total ini digunakan untuk menentukan jumlah total mikroorganisma aerob dan anaerob (psikrofilik, mesofilik dan termofilik) pada produk  perikanan.
Istilah dan definisi :
Angka lempeng total aerob : Jumlah mikroorganisma hidup yang membutuhkan oksigen yang terdapat dalam suatu produk yang diuji.
Inkubasi : Pengkondisian mikroorganisma untuk tumbuh dan berkembang biak sesuai dengan suhu dan waktu yang diperlukan.
Koloni : Sel mikroba yang tumbuh pada media agar dan dapat dilihat secara visual.
Mikroorganisma : Kelompok organisma yang berukuran kecil dan hanya dapat dilihat dibawah mikroskop.
Media Agar : Media padat yang digunakan untuk pertumbuhan mikrorganisme.
Psikofilik : Kelompok mikroorganisme yang hidup pada suhu kurang dari 20°C.
Mesofilik : Kelompok mikroorganisme yang hidup pada suhu 20 °C-40°C.
Termofilik : Kelompok mikroorganisme yang hidup pada suhu lebih besar dari 40°C.
Pertumbuhan mikroorganisme aerob dan anaerob (psikrofilik, mesofilik dan termofilik) setelah contoh diinkubasikan dalam media agar pada suhu 35°C ± 1°C selama 24 jam 48 jam ± 1 jam mikroorganisme ditumbuhkan pada suatu media agar, maka mikroorganisma tersebut akan tumbuh dan berkembang biak dengan membentuk koloni yang dapat langsung dihitung. Penentuan Angka Lempeng Total dapat dilakukan dengan dua cara. Pertama, metoda cawan agar tuang/pour plate yaitu dengan menanamkan contoh ke dalam cawan petri terlebih dahulu kemudian ditambahkan media agar. Kedua, metode cawan agar sebar/spread plate yaitu dengan menuangkan terlebih dahulu media agar ke dalam cawan petri kemudian contoh diratakan pada permukaan agar dengan menggunakan batang gelas bengkok.

• Peralatan

1. Timbangan dengan ketelitian 0,0001 g;
2. Autoclave;
3. Inkubator 35 °C ± 1°C
4. Anaerobic jar;
5. Cawan petri 15 mm x 90 mm;
6. Botol pengencer 20ml;
7. Alat penghitung koloni;
8. Blender beserta Jar yang dapat disterilisasi atau stomacher;
9. Batang gelas bengkok diameter 3 mm–4 mm, dengan panjang tangkai 15 cm-20 cm;
10. Pipet gelas atau pipetor : 0,1 ml, 1 ml, 5 ml dan 10 ml.

• Media dan pereaksi
  • Plate Count Agar, sesuai lampiran A (normatif);
  • Larutan Butterfield’s phosphate buffered, sesuai lampiran B (normatif);
  • Gas pack dan indikator air anaerob.

• Kondisi

Pada metode cawan agar tuang, untuk menghindari berkurangnya populasi bakteri akibat panas yang berlebihan maka media agar yang akan dituang mempunyai suhu
45°C ±1°C.

• Preparasi contoh

Berat contoh yang akan diuji diambil dengan ketentuan sebagai berikut:
a) Contoh dengan berat lebih kecil dari 1 kg
Dengan menerapkan teknik aseptis, ambil contoh secara acak dan potong kecil-kecil hingga beratnya mencapai 100 g.
b) Contoh dengan berat 1 kg–4,5 kg
Dengan menerapkan teknik aseptis, ambil contoh secara acak dan potong kecil kecil hingga beratnya mencapai 300 g.
c) Contoh dengan berat lebih besar dari 4,5 kg
Dengan menerapkan teknik aseptis, ambil contoh secara acak dan potong kecil kecil hingga beratnya mencapai 500 g.
Timbang contoh secara aseptik sebanyak 25 g untuk contoh dengan ketentuan a) dan b) dan 50 g untuk contoh dengan ketentuan c) diatas, kemudian masukkan dalam wadah atau plastik steril. Untuk contoh 25 g tambahkan 225 ml larutan butterfield’s phosphate buffered dan untuk contoh 50 g tambahkan 450 ml larutan butterfield’s phosphate buffered, homogenkan selama 2 menit. Homogenat ini merupakan larutan pengenceran 10-1. Dengan menggunakan pipet steril, ambil 1ml homogenat diatas dan masukkan ke dalam 9ml larutan butterfield’s phosphate buffered untuk mendapatkan pengenceran 10-2. Siapkan pengenceran selanjutnya (10-3) dengan mengambil 1 ml contoh dari pengenceran 10-2 ke dalam 9 ml larutan butterfield’s phosphate buffered. Pada setiap pengenceran dilakukan pengocokan minimal 25 kali. Selanjutnya lakukan hal yang sama untuk pengenceran 10-4, 10-5 dst sesuai kondisi contoh.

• Langkah Kerja :

1.Teknik Dilusi (Pengenceran)
Teknik dilusi sangat penting di dalam analisa mikrobiologi. Karena hampir semua metode perhitungan jumlah sel mikroba mempergunakan teknik ini, seperti TPC (Total Plate Count).
Cara Kerja :

• Dari larutan kultur kita ambil 1 ml dan kita masukkan ke dalam 9 ml air  steril atau larutan buffer pepton untuk memperoleh dilusi 1/10 bagian.
• Dari larutan dilusi 1/10 kita ambil 1 ml dan kita masukkan ke dalam 9 ml air  steril atau larutan buffer pepton untuk memperoleh dilusi 1/100 bagian.
• Dari larutan dilusi 1/100 kita ambil 1 ml dan kita masukkan ke dalam 9 ml air  steril atau larutan buffer pepton untuk memperoleh dilusi 1/1000 bagian.
• Dari larutan dilusi 1/1000 kita ambil 1 ml dan kita masukkan ke dalam 9 ml air  steril atau larutan buffer pepton untuk memperoleh dilusi 1/10.000 bagian.
• Dst

Maksud dari 1/10, 1/100, 1/1000, 1/10.000 dst adalah suatu rasio dilusi yang apabila pada tiap dilusi ditumbuhkan ke dalam suatu media dan koloninya yang tumbuh dapat dihitung, maka jumlah sel mikroba dapat diketahui dengan cara :
Maksud dari 1/10, 1/100, 1/1000, 1/10.000 dst adalah suatu rasio dilusi yang apabila pada tiap dilusi ditumbuhkan ke dalam suatu media dan koloninya yang tumbuh dapat dihitung, maka jumlah sel mikroba dapat diketahui dengan cara :
Jumlah koloni x   1
Pengenceran
Misal :
Apabila pada dilusi 1/100 tumbuh sebanyak 20 koloni, maka dapat diketahui jumlah sel adalah :      20 koloni x   1            = 2000 sel
1/100
Apabila pada dilusi 1/1000 tumbuh sebanyak 3 koloni, maka dapat diketahui jumlah sel adalah :       2 koloni  x   1            = 3000 sel
1/1000
Oleh karena itu, dengan metode dilusi kita dapat memperkirakan jumlah sel mikroba pada suatu benda atau produk.
2.Metode Pour Plate
Teknik pour plate (lempeng tuang) adalah suatu teknik di dalam menumbuhkan mikroorganisme di dalam media agar dengan cara mencampurkan media agar yang masih cair dengan stok kultur bakteri. Teknik ini biasa digunakan pada uji TPC (Total Plate Count). Kelebihan teknik ini adalah mikroorganisme yang tumbuh dapat tersebar merata pada media agar.
Pada cara ini dilakukan pengenceran dengan menggunakan sejumlah botol pengencer yang diisi aquadestilata steril.Agar cair didinginkan sampai suhu sekitar 440 C dan baru kemudian dituangkan ke cawan petri(gambar 7.2).Setelah agar membeku cawan dieramkan selama 24 – 48 jam (370C).Lempengan yang digunakan dalam perhitungan bakteri ialah lempengan yang mengandung 30 – 300 coloni. Jumlah bakteri perml ialah jumlah koloni dikalikan factor pengencer.
Cara kerja:
Hari pertama

1. Tandailah botol A,B dan C yang berisi aquadestilata steril.Tandai pula masing –masing cawan petri dengan nilai pengencerannya .
2. Kocok suspensi kuman yang akan dihitung jumlah bakterinya dan pindahkan 1ml suspensi ke botol A.
3. Kocok botol A sehingga bakteri tersebar dan terlepas dari kelompok atau rantainya (gambar 7.1)
4. Pindahkan 1ml dari botol A ke botol B,kemudian kocok.Dari botol B dipindahkan 0.1ml ke cawan petri yang bertanda 10-5 dan 1.0ml ke cawan petri yang bertanda 10-4.Pindahkan 1ml dari botol B ke botol C,kemudian kocok.Dari botol C dipindahkan 0.1ml ke cawan petri yang bertanda 10-7 dan 1ml ke cawan petri yang bertanda 10-6.
5. Tuangkan agar nutrien bersuhu 50⁰C ke dalam setiap cawan petri,putar –putar cawan tersebut sehingga suspensi tercampur dengan baik.
6. Setelah agar membeku,baliklah cawn petri dan masukan ke dalam lemari pengeram selama 24 – 48 jam(37⁰ C)

Hari kedua
1.  Hitung jumlah koloni pada lempengan agar.gunakan lempengan agar yang       mempunyai 30-300 koloni.
Bila tidak ada lempengan yang mempunyai kisaran jumlah koloni tersebut        gunakan lempengan agar yang mempunyai koloni 300 koloni.
2.  Tentukan jumlah mikroorganisme hidup dengan cara mengalihkan jumlah      koloni dengan faktor pengeceran.
3. Metoda cawan agar sebar /spread plate method
Teknik spread plate (lempeng sebar) adalah suatu teknik di dalam menumbuhkan mikroorganisme di dalam media agar dengan cara menuangkan stok kultur bakteri atau mengapuskannya di atas media agar yang telah memadat. Bedanya dengan pour plate adalah, pencampuran stok kultur bakteri dilakukan setelah media agar memadat sedangkan pour plate kultur dicampurkan ketika media masih cair (belum memadat). Kelebihan teknik ini adalah mikroorganisme yang tumbuh dapat tersebar merata pada bagian permukaan media agar.
Cara kerja :

1. Tuang 12 ml – 15 ml PCA ke dalam cawan-cawan petri steril dan dinginkan. Pipet 1 ml dari setiap pengenceran (10^-1,10^-2, dst) ke dalam cawan petri yang telah berisi media PCA diatas dan ratakan dengan menggunakan batang gelas bengkok. Lakukan secara duplo untuk setiap pengenceran.

CATATAN Untuk pengujian bakteri termofilik, media PCA yang dituang kedalam cawan sebanyak 40 ml – 50 ml.

1. Setelah contoh meresap kedalam agar (diamkan sekurang-kurangnya 1 jam); Untuk penentuan mikroorganisme aerob inkubasi cawan-cawan tersebut dalam posisi terbalik dalam inkubator selama 48 jam ± 2 jam pada suhu 22°C ±1°C (psikrofilik); 35°C (mesofilik); 45°C (termofilik). Untuk penentuan mikroorganisme anaerob, inkubasi cawan-cawan tersebut dalam posisi terbalik dalam anaerobik jar dan masukkan kedalam inkubator selama 48 jam ± 2 jam pada suhu 22°C ± 1°C (psikrofilik); 35°C (mesofilik); 45°C (termofilik).
2. Lakukan kontrol tanpa contoh dengan mencampur larutan pengencer dengan media PCA.

• Pembacaan dan perhitungan koloni pada cawan petri

a. Cawan yang mengandung jumlah 25 koloni–250 koloni dan bebas spreader
Catat pengenceran yang digunakan dan hitung jumlah total koloni. Perhitungan Angka Lempeng Total sebagai berikut :
_{N =} Σ C
[(1 x n 1) + (0,1 x n2)] (x d)


dengan :
N adalah jumlah koloni produk, dinyatakan dalam koloni per ml atau koloni per g;
ΣC adalah jumlah koloni pada semua cawan yang dihitung;
n1 adalah jumlah cawan pada pengenceran pertama yang dihitung;
n2 adalah jumlah cawan pada pengenceran kedua yang dihitung;
d adalah pengenceran pertama yang dihitung.
CONTOH:
Pengenceran    : 1:100                         1:1000
Jumlah koloni : 232 dan 244               33 dan 28
_{N =} (232 +244 +33+ 28)
[(1 x 2) + (0,1x 2)]10 ⁻²
=   537/0,022
=   24.409
=   24.000
b.Cawan dengan jumlah koloni lebih besar dari 250
Bila jumlah koloni per cawan lebih besar dari 250 pada seluruh pengenceran maka laporkan hasilnya sebagai terlalu banyak untuk dihitung (TBUD), tetapi jika salah satu pengenceran mempunyai jumlah koloni mendekati 250 laporkan sebagai perkiraan ALT.


CONTOH:
Pengenceran : 1 : 100 1 :1000
Jumlah koloni : TBUD 640
Perkiraan ALT koloni per ml atau per g : 640.000
Spreader
Koloni spreader dibedakan menjadi 3 tipe :

1. Rantai koloni, antara koloni saling menyambung yang disebabkan karena bakteri yang saling mengelompok.
2. Spreader berasal dari lapisan air antara agar dan dasar cawan.
3. Spreader berasal dari lapisan air pada sisi/pinggir cawan atau pada permukaan agar.

Jika cawan ditumbuhi spreader lebih besar dari 25% maka laporkan sebagai spreader:
•  Spreader tipe 1, jika hanya ada 1 rantai maka nyatakan sebagai 1 koloni.
•  Jika 1 atau lebih rantai terlihat berasal dari sumber yang berbeda, laporkan
masing-masing sumber sebagai 1 koloni.
• Spreader tipe 2 dan 3 umumnya berasal dari koloni yang berbeda dan laporkan
masing-masing sebagai 1 koloni.

1. Jumlahkan spreader dan koloni untuk menghitung “ Angka Lempeng Total”.

c. Jumlah koloni semua cawan kurang dari 25 koloni atau cawan tanpa koloni.
Bila pada kedua pengenceran yang digunakan diperoleh koloni kurang dari 25, catat koloni yang ada, tetapi nyatakan perhitungan sebagai kurang dari 25 dan dikalikan dengan 1/d, dimana d adalah faktor pengenceran pertama yang digunakan dan dilaporkan sebagai perkiraan ALT.

CONTOH:
Pengenceran : 1:100 1:1000
Jumlah koloni : 18 dan 0 2 dan 0
Perkiraan ALT koloni per ml atau koloni per g : lebih kecil dari 2.500 lebih kecil dari 2.500.

• Pelaporan
• Untuk menghasilkan perhitungan yang akurat dan teliti, maka laporkan hasilnya      dengan   dua angka (digit) pertama sebagai hasil pembulatan.
• Bulatkan keatas dengan cara menaikkan angka kedua menjadi angka yang lebih tinggi bila angka ketiga adalah 6, 7, 8 atau 9 dan gunakan angka 0 untuk masing-masing angka pada digit berikutnya.
• Bulatkan ke bawah bila angka ketiga adalah 1, 2, 3 atau 4. Bila angka ketiga 5, bulatkan keatas bila angka kedua ganjil dan bulatkan kebawah bila angka kedua itu genap.

CONTOH:
Hasil perhitungan            ALT
12.700                            13.000
12.400                            12.000
15.500                            16.000
14.500                            14.000

• Beri tanda bintang (*) untuk cawan yang kurang dari 25 koloni.

CONTOH:
Pengenceran                              : 1:100                                           1:1000
Jumlah koloni                            : 18 dan 0                                       2 dan 0
Perkiraan ALT koloni               : lebih kecil dari 2.500*    lebih kecil dari 2.500*
per ml atau koloni per g

• Jika seluruh cawan berisi spreader atau cawan terkontaminasi oleh sesuatu yang tidak diketahui, maka laporkan hasil sebagai ’Kegagalan dalam pengujian’.

Contoh perhitungan :
1.   Cawan dengan jumlah koloni 25-250
Perhitungan Angka Lempeng Total sebagai berikut :

_{N =} Σ C
[(1 x n 1) + (0,1 x n2)] (x d)
dengan :
N adalah jumlah koloni produk, dinyatakan dalam koloni per ml atau koloni per g;
ΣC adalah jumlah koloni pada semua cawan yang dihitung;
n1 adalah jumlah cawan pada pengenceran pertama yang dihitung;
n2 adalah jumlah cawan pada pengenceran kedua yang dihitung;
d adalah pengenceran pertama yang dihitung.
CONTOH:
Pengenceran : 1:100 1:1000
Jumlah koloni : 232 dan 244 33 dan 28
_{N =} (232 +244 +33+ 28)
[(1 x 2) + (0,1x 2)]10 ⁻²
=   537/0,022
=   24.409
=   24.000
2.   Seluruh cawan berisi spreader dan atau Kegagalan dalam pengujian. Laporkan hasil
sebagai “Spreader” (SPR) atau kegagalan dalam pengujian
3.   Seluruh cawan berisi lebih dari 100 koloni/cm2 . Perkiraan jumlah angka lempeng total adalah lebih besar dari (>) 100 dikalikan pengenceran tertinggi dan kalikan dengan luas cawan. Contoh dibawah berdasarkan pada penghitungan rata-rata 110/cm2.
CONTOH:
Perkiraan ALT/ml (g)
Pengenceran          :   1 : 100                                  1:1000
Jumlah koloni        :   tak hingga        7.150^a lebih besar dari 6.500.000 ^b
tak hingga        6.490^c lebih besar dari 5.900.000
•  ^a berdasarkan luas area 65 cm²
•  Perkiraan jumlah ALT
•  ^c berdasarkan luas area 59 cm²
CATATAN : Untuk perhitungan koloni yang menggunakan metode cawan agar sebar/spread plate, jumlah koloni yang dihitung dikalikan dengan 10 dari pengenceran yang digunakan.

Skema penentuan angka lempeng total (ALT)
6.Total Count
Dimaksud dengan total count  yaitu kalau perhitungan jumlah tidak berdasarkan kepada jenis, tetapi secara kasar terhadap golongan atau kelompok besar mikroorganisme umum seperti bakteri, fungi mikroalge ataupun terhadap kelompok bakteri tertentu.
Total count bacteria misalnya ditentukan berdasarkan penanaman bahan dalam jumlah dan pengenceran tertentu ke dalam media yang umum untuk bacteria. Setelah melalui masa inkubasi pada temperature kamar selama waktu maksimal 4 x 24 jam, perhitungan koloni dilakukan. Dianggap bahwa tiap koloni berasal dari sebuah sel, maka jumlah koloni dapat diperhitungkan sebagai jumlah sel mewakili dan terdapat di dalam bahan yang dianalisis.
Juga terdapat total count fungi dilakukan metoda yang sama, kecuali temperature inkubasi 28   1⁰ C. Di dalam pelaksanaan agar selama pertumbuhan tidak diganggu oleh koloni bakteri maka kepada permukaan media sebelum diberi bahan yang akan dianalisis, ditambahkan terlebih dahulu larutan asam laktat 3%.
Terhadap mikroalge, media yang digunakan harus bersifat semisolid atau cair, yaitu dengan penambahantepung agar 50% dari yang diperlukan. Karena kalau penggunaan tepung agar sesuai untuk bacteria ataupun fungi, pertumbuhan mikroalge akan lambat atau terhambat sama sekali. Berbeda dengan biakan bakteri ataupun fungi, maka biakan mikroalge harus ditempatkan pada tempat yang terang atau dikenai oleh cahaya matahari, selama 5- 15 hari.
Jenis media yang digunakan untuk perhitungan total count kelompok lain, pada dasarnya berbentuk media selektif atau pengaya. Karena sifat selektifitas dari media, pada akhirnya kalaupun ada bacteria yang tidak diharapkan dapat tumbuh dan berkembang didalamnya, selain memerlukan waktu yang cukup lama (diatas 10 x 24 jam) juga koloni yang kemudian terbentuk tidak dapat menjadi besra dan mudah hilang dari pengamatan dengan menggunakan mata biasa. Pada umumnya karena kelompok bacteria tertentu memerlukan masa adaptasi/ aklimatisasi terlebih dahulu, inkubasi di dalam temperature kamar memerlukan waktu antara 4-6 x 24 jam baru koloni akan tampak jelas pertumbuhannya.
Misal, total count bakteri-pereduksi-sulfat, bakteri belerang dan bakteri-besi, dsb. Dari hasil perhitungan ini akan diketahui sampai berapa jauh kandungan bakteri yang mempunyai kemampuan untuk melakukan deteriosasi, korosi, dan degradasi terhadap benda (khususnya benda-benda logam) di dalam perairan. Dapat juga ditentukan hubungan nilai antara kehadiran kelompok bakteri di atas dengan nilai korosi pada benda-benda logam yang berhubungan langsung dengan perairan.
Total count terhadap bakteri pathogen, khususnya untuk penyebab penyakit perut, seperti tifus, paratifus, kolera, disentri, dsb, yang disebabkan oleh Salmonella, shigella dan Vibrio, juga memerlukan media pengaya dan media selektif.
Total count terhadap bakteri penghasil racun, khususnya yang menyebar melalui air dan mengenai bahan makanan dan disebabkan oleh bakteri aerobic (Pseudomonas,Staphylococcus) dan anaerob (Clostridium) serta total count dan identifikasi jenis-jenis fungi penghasil mikotoksin khususnya yang termasuk kelompok Aspergillus, Penicillium, dan fusarium, juga sama seperti untuk golongan pathogen.
Dari hasil/data sementara ternyata bahwa pada lingkungan yang jelek populasi dan jumlah jenis mikroorganisme tersebut sangat tinggi, sehinga kasus atau gejala penyakit dan keracunan  juga sangat tinggi. Khusus untuk fungi penghasil mikotoksin sangat ditakuti pertumbuhannya pada bahan makanan, karena akan menghasilkan racun jamur (mikotoksin) yang bersifat karsinogenik (dapat merangsang terjadinya kanker, terutama pada kanker hati).
Keberhasilan analisi terhadap kelompok pathogen dan penghasil toksin, baru dapat berhasil kalau menggunakan media pengaya dan selektif. Hal ini mengingat pula bahwa kemungkinan besar kehadiran kelompok tersebut di dalam substrat sagat sedikit atau jarang jumlahnya.
Penghitungan Jumlah Bakteri
Untuk menentukan jumlah bakteri dapat dilakukan beberapa cara:

1. Jumlah bakteri secara keseluruhan (total cell count).
2. Jumlah bakteri yang hidup (viable count).

Cara in hanya menggambarkan sel yang hidup,sehingga lebih tepat dibandingkan teknik pada butir 1.
1) PENGHITUNGAN BAKTERI SECARA KESELURUHAN

1. a. Menghitung Langsung Secara Mikroskopis

Pada cara ini dihitung jumlah bakteri dalam satuan isi yang sangat kecil.Untuk ini digunakan kaca objek khusus yang bergaris berbentuk bujur sangkar.Jumlah cairan yang terdapat antara kaca obyek dan kaca penutup mempunyai volume tertentu,sehingga satuan isi yang terdapat dalam satu bujur sangkar juga tertentu.
Pembesaran yang digunakan untuk melihat bakteri membatasi volume cairan yang diperiksa.Hanya cairan yang mengandung bakteridalam jumlah tinggi yang dapat menggunakan cara ini.Selain menghitung secara langsung dengan mata,dapat pula menggunakan alat penghitung elektronik Coulter counter.Dengan alat ini dihitung semua benda yang memiliki ukuran diameter 30 um,sehingga cairan yang akan dihitung jumlah bakterinya haruslah benar-benar hanya mengandung bakteri.

1. b. Menghitung Dengan Cara Kekeruhan

Cara ini menggunakan spektrofotometer atau nefelometer.Dasar teknik ini adalah banyaknya cahaya yang diabsorsi sebandig dengan banyaknya baktri pada batas- batas tertentu.
Cara ini akan diterangkan pada  akhir bab ini, karena diperlukan keterampilan teknik menghitung junlah hidup.
2.      MENGHITUNG BAKTERI DENGAN METODE KERAPATAN OPTIK
Jumlah mikroorgamisme dalam suspensi dapat di tentukan dengan kerapatan optik(OD=OPTIKAL DENSITY).Pengukuran kerapatan optik menggunakan kolorimeter yang membiaskan cahaya dengan gelombang tertentu.Gelombang cahaya melewati suspensi bbiakan dan banyaknya yang ditransmisikan setela melewati suspensi diukur jumlah cahaya yang ditransmisikan setelah melewati suspensi biakan berbanding terbalik dengan jumlah mikroorganisme dan jumlah cahaya yang diabsorpsi.Jumlah cayaha yang diabsorpi tergantung pada bentuk dan besar sel.
Spektropotometer dapat mengukur kepekatan sel dalm suspensi dalam % T (transmittance )atau OD(jumlah cahaya yang di absorpsi dan di sebarkan.)
Dalam mikrobiolog i di gunakan OD sebagai satuan hitungan,karena OD sebanding dengan kepekatan sel dalam suspensi biakan.
Dalam menggunaannya,penentuan jumlah sel dan penggunaan  OD memerlukan 2 tahap(gambar 7.3 dan 7.4).Pada tahap pertama spektropotometer dikalibrasi mempunyai daya absorpsi 0 bila tidak ada sel.Ini dilakukan dengan memasukan kuvet yang berisi larutan pengencer yang digunakan dalam perhitungan sel.Lazimnya larutan pengencer yang digunakan adalah aquadestillata,nutrient broth,atau NaCl faali.
Kekeruhan biakan diukur dan nilai absorpsi dibaca.Nilai absorpsi sebanding dengan jumlah mikroorganisme dalam sampel dan dapat digunakan untuk menduga jumlah mikroorganisme dalam sampel.
Kerapatan optik suatu suspensi tidak langsung menunjukan jumlah sel dalam suatu populasi,namun menunjukan jumlah cahaya yang disebarkan oleh populasi tersebut.untuk memperoleh jumlah mikroorganisme,maka nilai kerapatan optik harus disetarakan terlebih dahulu dengan jumlah mikroorganisme(CFU/ml).untuk memperoleh nilai ini dilakukan berbagai pengenceran sampel yang digunakan dalam OD.jumlah mikroorganisme ditentukan dengan cara jumlah hitung mikroorganisme hidup(viable count).setalah diperoleh nila ini dibuat kurva kalibrasi dengan sumbu X sebagai jumlah hidup(viable count) dan sumbu Y sebagai nilai OD.
a.Penentuan Jumlah Hitung Dengan Mengukur Kerapatan Optik (OD).
Hari pertama

1. buat pengenceran bertingkat dari biakan E.coli.Pengenceran yang digunakan adalah ½,1/4 ,1/8 ,1/16,dan 1/32.

-          Tndai tabung yang mengandung 5ml TSB dengan faktor pengenceran (1/2-1/32)
-          Campur biakan E.coli dengan baikm dengan cara menggoyang bagian dasar tabung beberapa kali dengan jari telunjuk sedangkan tangan lainnya memegang ujung tabung (gambar 6.7)
-          Pindahkan 5ml suspensi biakan E.coli ke dalam tabung dengan pengenceran ½,kemudian campur dengan baik.
-          Pindahkan 5ml dari pengenceran ½ kedalam tabung pengenceran ¼ kemiudian campur dengan baik.
-          Lakukan hal yang sama untuk memperoleh pengenceran 1/8,dan 1/16,dan 1/32.

1. Kalibrasi spektrofotometer untuk nilai absorpsi 0.0 dengan larutan pengencer TSB (Trypticase Soy Broth)

-          Atur panjang gelombang pada 686 nm.
-          Nyalakan kolorimeter dan biarkan selama 20 menit.
-          Atur  kolorimeter sehingga jarum menunjukan absorpsi 0.0 dengan mengutar tombol pengatur.
-          Pipet 5ml TSB dan masukan kedalam kuvet.Perhatikan bahwa kuvet tetap bersih.Kuvet yang tidak bersih menggangu jalannya cahaya sehingga membiarkan hasil yang menyimpang.
-          Buka tempat penutup sampel,kemudian masukan kuvet yang mengisi TSB.
Tutup penutup tempat sampel.
-          Atur absorpsi sehingga jarum menunjukan 0.0 dengan memutar tombol.
-          Keluarkan kuvet yang berisi TSB.

1. Baca nilai absorpsi dari biakan E.coli.

-          Pipet 5ml biakan E.coli dan masukan kedalam kuvet yang bersih gunakan teknik aseptis sewaktu pemindahan biakan sehingga tidak mencemari peralatan yang digunakan.
-          Masukan kuvet,tutup penutup temap sampel dan baca nilai absorpsi.
-          Tulis hasil pembacaan pada kertas yang telah disiapkan.
-          Keluarkan kuvet,dan bung biakan dalam pembuangan yang disediakan.
-          Lakukan hal yang sama untuk memperoleh nilai absorsi dari pengenceran suspensi ½-1/32.

1. laporkan hasil perapatan optik dari biakan E.coli serta pengenceran suspansi1/2-1/32.

Hari kedua
1.buat kurva kalibrasi dengan OD pada sumbu Y dan jumlah hidup pada sumbu X.
2. laporkan hasil pengukuran.
















BAB II
MPN

Metode MPN (Most Probable Number) untuk uji kualitas mikrobiologi air dalam praktikum digunakan kelompok Coliform sebagai indikator. Kelompok Coliform mencakup bakteri yang bersifat aerobik dan anaeorobik fakultatif, batang gram negatif dan tidak membentuk spora. Coliform memfermentasikan laktosa dengan pembentukkan asam dan gas dalam waktu 48 jam pada suhu 35°C (Hadioetomo, 1993).
Dalam metode MPN digunakan medium cair, berbeda dengan metode cawan yang menggunakan medium padat (Agar). Perhitungan dilakukan berdasarkan jumlah tabung yang positif, yaitu yang ditumbuhi oleh mikroba setelah inkubasi pada suhu dan waktu tertentu. Pengamatan tabung positif dapat dilihat dengan timbulnya kekeruhan atau terbentuk gas dalam tabung durham (Sutedjo, 1991).
Mikroorganisme sebagai indicator kualitas air :
Panda pemeriksaan microbiologist yang rutin terhadap air untuk menentukan aman tidaknya unstuck diminum, tidaklah cukup bila mendasarkan uji-uji yang digunakan hanya terhadap adanya (terisolasinnya) mikroorganisme patogenik karena alasan sebagai berikut :

1. Kemungkinan besar pathogen masuk ke dalam air secara sporadic, tetapi karena tidak dapat bertahan hidup lama mungkin saja tidak terdapat di dalam contoh air  yang dikirimkan ke laboratorium.
2. Bila terdapat jumlahnya amat sedikit, maka besar kemungkinan pathogen-patogen tersebut ridak terdeteksi olah prosedur laboratories yang digunakan.
3. Hasil pemeriksaan laboratorium  baru dapat diketahui setelah 24 jam atau lebih. Arabia ternate ditemukan adanya pathogen sementara itu tentunya banyak orang telah mengkonsumsi air tersebut dan telah tereksposi terhadap infeksi sebelum dapat dilakukan usaha untuk mengatasi situasu tersebut.

Mikroorganisme indicator
Istilah “mikroorganisem indicator” sebagaimana digunakan dalam analisi air mengacu pada sejenis mikroorganisme yang kehadirannya di dalam air merupakan bukti bahwa air tersebut terpolusi oleh tinja dari manusia atau hewan merdarah panas. Artinya, terdapat peluang bagi berbagai macam mikroorganisme patogenik, yang secara berkala terdapat dalam saluran pencernaan, untuk masuk ke dalam ait tersebut.
Beberapa ciri penting suatu organisme indicator adalah :

1. teradpat dalam air tercemer dan tidak ada dalam air yang tidak tercemar.
2. terdapat dalam air bila ada patogen.
3. jumlah mikroorganisme indikator berkorelasi dengan kadar polusi.
4. mempnyai kemampuan bertahan hidup yang lebih besar daripada patogen.
5. mempunyai sifat yang seragam dan mantap.
6. tidak berbahaya bagi manusia dan hewan.
7. terdapat dalam jumlah yang lebih banyak daripada patogen (hal ini membuatnya mudah terdeteksi).
8. mudah dideteksi dengan teknik-teknik laboratorium yang sederhana.

Beberapa spesies atau kelompok bakteri telah dievaluasi untuk menentukan sesuai tidaknya untuk digunakan sebagai oeganisme indikator. Di antara organisme-organisme yang dipelajari, yang hampir memenuhi semua persyaratan suatu organisme indikator yang ideal ialah Escherichia coli dan kelompok bakteri koli lainnya. Bakteri-bakteri tersebut dianggap sebagai indikator polusi tinja yang dapat diandalkan.
Escherichia coli dan bakteri koliform lain
Escherichia coli adalah penghuni normal saluran pencernaan manusia dan hewan nerdarah panas. Biasanya tidak patogenik, anggota lain kelompok koliform ialah Klebsiella pneumoniae, yang tersebar luas di alam; terdapat dalam tanah, air, dan padi-padian, dan juga dalam saluran penceranaan manusia dan hewan. Eterobacter aerogenes, sejenis bakteri koliform yang terdapat dalam saluran pencernaan manusia dan hewan juga terdapat dalam tanah, air. Koliform sebagai suatu kelompok dicirikan sebagai bakrei berbentuk batang gram negative, tidak membentuk spora, aerobic dan anaerobic fakultatif yang memfermentasi lactose dengan menghasilkan asam dan gas dalam waktu 48 jam pada suhu 35 ⁰C.
Kelompok koliform mempunyai beberapa cirri yang juga dimiliki oleh anggota-anggota genus Salmonella dan Shigella, yaitu duagenera yang mempunyai spsies-spesies enteric patogenik. Namun, ada perbedaan biokimiawi utama yangn nyata yaitu bahwa koliform dapat memfermentasikan lactose dengan menghasilkan asam dan gas, sedangkan Salmonella dan Shigella tidak memfermentasikan lactose.
Pemeriksaan bakteriologis untuk menentukan potabilitas air
Hal-hal yang harus diperhatikan dalam pengambilan sampel air :

1. contoh air harus ditempatkan dalam botol yang steril.
2. contoh tersebut harus dapat mewakili sumbernya.
3. contoh air tidak boleh terkontaminasi selama dan setelah pengambilan.
4. contoh tersebut harus diuji segera setelah pengmbilan.
5. apabila ada penundaan pemeriksaan maka contoh tersebut harus disimpan pada suhu antara 0 sampai 10 ⁰C.

Prosedur yang biasa digunakan adalah hitungan cawan (plate count) untuk menetapkan jumlah bakteri yang ada dan uji-uji untuk menepakkan adanya bakteri koliform.
Pengujian bakteri Coliform yang berasal dari cemaran tinja (faecal coliform) secara serentak dengan uji penegasan yang menggunakan media BGLB, maka dilakukan juga hal yang sama yaitu 1 ose kultur yang positif dari LST Broth atau LB, dipindahkan ke dalam tabung EC medium yang baru. Semua tabung MC medium yang telah diinokulasikan oleh kultur dari LST-Broth, kemudian diinkubasikan pada suhu 45,5°C selama 24 jam dan hasil pembentukan gas dicatat. Kerapatan bakteri faecal coliform diperkirakan dengan tabel MPN. Diferensiasi bakteri coliform dapat diarahkan ke dalam reaksi IMVIC (Buckle, 1987).
Berbagai macam uji mokrobiologis dapat dilakukan terhadap bahan pangan, meliputi uji kuantitatif mikroba untuk menentukan daya tahan suatu makanan, uji kualitatif bakteri patogen untuk menenetukan tingkat keamanan dan uji indikator untuk menentukan tingkat sanitasi makanan tersebut. Pengujian yang dilakukan terhadap tiap bahan pangan tidak sama tergantung berbagai faktor, seperti jenis dan komposisi bahan pangan, cara pengepakan dan penyimpanan serta komsumsinya, kelompok konsumen dan berbagai faktor lainnya (Djide, 2003).



BAHAN DAN CARA
1. Jenis sampel yang diteliti
Bahan-bahan yang diperiksa dalam penelitian ini adalah air  minum untuk para pasien maupun petugas rumah sakit yaitu air  putih matang dan air teh, air mandi pasien yang ada di bangsal-bangsal perawatan, air untuk keperluan masak di dapur umum, air cud alat-alat serta air cuci tangan perawat. Sedangkan jenis makanan dan minuman yang diperiksa adalah nasi/bubur, sayur/ lauk, daging/telur, roti dan susu dalam bentuk minuman.
2. Cara pengambilan sampel
Pengambilan sampel dilakukan secara aseptis. Untuk sampel air diambil sebanyak 200 ml dari tiap-tiap jenis air yang diteliti dan ditempatkan pada botol steril. Untuk sampel makanan di-ambil kira-kira sebanyak 10 gram untuk tiap jenis makanan yang diteliti dan dimasukkan ke dalam wadah yang steril pula. Transportasi sampel dari rumah sakit ke laboratorium di-lakukan dengan menempatkan sampel-sampel tersebut ke dalam box es dengan suhu sekitar 4° C.
3. Idenfikasi mikrobiologis
Identifikasi mikrobiologis dilakukan dengan menggunakan metode yang telah dibakukan oleh WHO (1987)
Dalam identifikasi mikrobiologis ini terutama untuk sampel makanan dan
minuman pertama-tama dilakukan kultur terhadap masing-masing sampel dengan media spesifik. Dari tahap kulturisasi kemudian dilakukan pemeriksaan lanjutan yang meliputi pe-meriksaan mikroskopis setelah terlebih dahulu dilakukan penawaran Gram dan pemeriksaan yang lain seperti uji biokimia dan uji serologi untuk identifikasi jenis mikroba tertentu. Identifilcasi mikrobiologi ini ditujukan untuk deteksi beberapa jenis bakteri yang dapat menyebabkan infeksi nosokomial
seperti : Staphylococcus sp, Pseudomonas, E. coil Salmonella, Shigella, Streptococcusm Klebsiella, Proteus dan kuman-kuman gram negatip maupun gram positip lainnya. Identifikasi mikrobiologi terhadap sampel air dilakukan dengan metode MPN (Most Probable Number) per 100 ml air. Metode ini ditujukan untuk mendeteksi adanya pencemaran air oleh tinja manusia. Sebagai indikator terhadap pencemaran tinja manusia adalah adanya bekteri E. coli/coliform dalam sampel air yang diperiksa.














BAB III
UJI BONTEREY

1.FERMENTASI KARBOHIDRAT
Uji fermentasi karbohidrat dilihat dari kemampuan mikroorganisme memfermentasikan berbagai karbohidrat. Hasil akhir fermentasi ditentukan oleh sifat mikroba, media biakan yang digunakan,serta factor lingkungan.glukosa termasuk senyawa yang paling seing digunakan untuk fermentasi.
Untuk menentukan adanya fermentasi dilaboratorium digunakan media kaldu karbohidrat dan media MR-VP. Pembentukanasam dapat ditentukan dengan menambahkan indikatorkedalam  media
Kaldu karbohidrat digunakan untuk uji pembentukan asam dan gas.dengan menggunakn tabung smith atau tabung durham. Tabung smith digunakan bila jumlah dan macam gas yang dihasilkan harus ditentukan, sedangkan tabung durham digunakan jika jumlah dan macam gas tidak ditentukan. Bila terbentuk gas maka, gas masuk kedalam tabung durham dan mendesak cairan dalam tabung ini. Gas ini terlihat sebagi gelembung udara yang terperangkap dalam tabung.
Kaldu karbohidrat mengandung 0,5-1% karohidrat. Yang sering digunakan adalah glukosa,laktosa,dan manitol,maltosa dan sukrosa. Selain karbohidrat juga ditambahkan beef extract dan peptone sebagai sumber nitrogen, vitamin dan mineral. Bila dalam fermentasi bakteri ditumbuhkan dalam biakna cair yang mengandung glukosa, maka hasil fermentasi berupa asam.asam yang dihasilkan akan menurunkan pH media biakan. Indicator yang digunakan aalah merah fenol dan bromcesol purple. Bila dalam media biaka ditambahkan ditambahkan indicator tersebut maka pembentukan asam ini ditandai oleh perubahan warna menjadi kuning, pada pH >7, merah fenol berwarna merah sedangkan bromcesol purple berwarna ungu.
Bahan yang diperlukan :
Bahan : Escherichia coli
Staphilococcus aureus
Micrococcus luteus
Saccaromyces cereviciae
Media : kaldu karbohidrat
Glukosa, sukrosa, laktosa, maltosa dan manitol yang mengandung indikator BCP (brom cresol purple). Selain BCP dapat digunakan PR (phenol red) sebagai indikator pH.
Cara kerja :
Hari pertama

1. Tandai tabung kaldu karbohidtar dengan : jenis karbohidrat, nama siswa, biakan yang diinokulasikan, biakan yang digunakan untuk deret karbohidrat pertama adalah E. Coli, derat kedua S. Aureus, deret ketiga M. Luteus, deret keempat S. Cereviciae dan deret kelima sebagai kontrol.
2. Inokulasi deret karbohidrat pertama dengan E. Coli, derat kedua S. Aureus, deret ketiga M. Luteus, deret keempat S. Cereviciae dan deret kelima sebagai kontrol. Lakukan inokulasu dengan hati-hati sehingga tidak menimbulkan gelembung gas dalam tabung durham.
3. Inkubasikan kelima deret tabung dalam inkubator 35 ⁰C selama 24 jam.

Hari kedua

1. Periksa adanya fermentasi karbohidrat dengan melihat pembentukan asam danm pembentukan gas. Pembentukan asam terlihat sebagai perubahan warna kaldu karbohidrat menjadi kuning. Pembentukan gas terlihat dalam durham. Perhatikan bahwa dalam tabung kontrol tidak terjadi pembetnukan gas. Pembentukan gas dalam tabung kontrol dapat terjadi bila sewaktu diinokulasi tabung yang berisi kaldu dikocook terlalu keras atau bila digunakan kaldu yang disimpan dalam lemari es. Daya larut oksigen berkurang dalam kaldu yang dingin, namun sewaktu diinkubasikan pada suhu 37 ⁰C oksigen dapat terperangkap dalam tabung durham.
2. Laporkan hasil reaksi dalam kaldu karbohidrat.

2.UJI METHYL RED
Uji methyl red diguakan untuk menentukan adanya fermwntasi asam campuran beberapa bakteri memefermentasikan glukosa dan menghasilkan berbagai produk sehingga akan menurunkan pH media pertumbuhannya menjadi 5.0 atau lebih rendah. Penambahan indicator pH methyl red dapat menunjukan adanya perubahan pH menjadi asam. Methyl red berwarna merah pada lingkungan dengan pH 4.4 dan berwarna kuning dalam pH 6.2.
Fermentasi asa campuran ditentukan dengan cara menumbuhkan mikroorganisme dalam kaldu yang mengandung glukosa, dan setelah masa inkubasi menambbahkan reagens methyl red kedalam kaldu. Bila terjadi fermentasi asam campuran maka kaldu biakan berubah menjadi kunin setelah penambahn methyl red. Uji ini sangat berguna dalam identifikasi kelompok bakteri yang menempati saluran pencernaan.
Bahan yang diperlukan :
Escherichia coli
Enterobacter aerogenes
Kaldu MR-MV (methyl red- voges proskauer)
Cara mengerjakan :
Hari pertama

1. tandai tabung kaldu MR-MV dengan biakan bakteri yang digunakn
2. inokulasi kaldu MR-MV dengan biakan bakteri.
3. inkubasikan dalam 35 ⁰C selama 5 x 24 jam

Hari kedua

1. tambahkan 5 tetes reagens methyl red ke dalam tabung MR-MP
2. Laporkan hasil nya.

Uji bersifat positif bila kaldu berwarna merah setelah penambahan reagens methyl red .
Uji negatif bila kaldu MR-MV berubah menjadi kuning atau jingga setelah penambaha reagens.
3.UJI VOGES-PROSKAUER
Uji ini digunakan untuk mengidentifikasi mikroorganisme yang melaksanakan fermentasi 2,3 butanadiol. Bila memfermentasikan karbohidrat menjadi  2,3 butanadiol sebagai produk utama, akan terjadi pennumpukan bahan tersebut dalam media pertumbuhan. Penambahan 40% KOH dan 50% larutan alphanaphtol dalam etanol dapat menentukan adanya asetoin yaitu senyawa pemua dalam sintesis 2,3 butanadiol. Pada penambahn KOH adanya asetoin ditunjukan dengan adanya perubahan warna kaldu enjad merah muda. Perubahan warna diperjelas dengan perubahan warn aalpha naphtol.
Uji voges proskauersebenarnya merupakan uji tidak langsung ntuk megetahui adanya 2,3 butanadiol. Asetoin adalah senyawa pendahhulu dan selalu didapatka secera serentak sehingga uji VP abash untuk menentukan adanya 2,3 butanadiol.
Bahan yang diperlukan ;
Biakan  : Escherechia coli enterobacter aerogenes
Kaldu MR-MV (Methyl Red – Voges Proskauer )
Larutan 40 % KOH
Larutan 5 5 alpha-naphtol
Cara mengerjakan :
Hari pertama :
1)        Tandai kaldu MR-MV dengan biakan bakteri iyang digunakan.
2)        Inokulasi kaldu MR-MV dengan biakan bakteri.
3)        Inkubasikan dalam 35 ⁰C selama 24 – 48 jam.
Hari kedua

1. tambahkan 10 tetes larutan 40 % KOH dan 15 tetes larutan alpha-naphtol dalam kaldu MR-MV.kocok tabung sehingga kaldu terlihat berbuih. Pengocokan dengan baik meningkatkan aerasi sehingga terjadi paningkatan oksidasi 2,3 butanadiol menjadi asetoin dan memperjelashasil reaksi uji ini. Hasil reaksi dapat trelihat paling lambat setelah 30 menit.
2. laporkan hasilnya.

Uji bersifat posotof bila kaldu berwarna merah dalam waktu 30 menit setelah penambahan reagens.
Uji bersifat negatif bila kaldu MR-MV tidak memperlihatkan perubahan warna setelah penambahan reagens.
4.UJI OKSIDASE
Uji ini berfungsi untuk menentukan adanya oksidasesitokrom yang ditemukan pada mikroorganisme tertentu. Uji ini berguna dalam identifikasi mikroorganisme pathogen. Seperti misalnya Neisseria gonorrhoea dan Pseudomonas aeruginosa. Kedua bakteri ini memberikan hasilpositif dalam uji oksidase. Bila koloni bakteri yang bersifat oksidase positif diberi reagen oksidase, maka warna koloni berbah menjadi hitam dalam waktu 30 menit. Perubahan wara ini disebabakan oksidase sitokrom mengoksidasikan larutan reagens. Reagens yang dioksidasi berwarna hitam, namun bila terjadi reaksi reduksi, tidak terjadi perubahan warna.
Bahan yang diperlukan :
Escherichia coli
Enterobacter aerogenes
Kaldu MR-MV (methyl red- voges proskauer)
Cara mengerjakan :
Hari pertama

1. Tandai tabung kaldu MR-MV dengan biakan bakteri yang digunakn
2. Inokulasi kaldu MR-MV dengan biakan bakteri.
3. Inkubasikan dalam 35 ⁰C selama 5 x 24 jam

Hari kedua

1. Tambahkan 5 tetes reagens methyl red ke dalam tabung MR-MP
2. Laporkan hasil nya.

Uji bersifat positif bila kaldu berwarna merah setelah penambahan reagens methyl red .
Uji negatif bila kaldu MR-MV berubah menjadi kuning atau jingga setelah penambaha reagens.
5.UJI KATALASE
Katalase adalah enzim yang mengkatalasisakan penguraian hidroge peroksida menjadi air dan O₂. hydrogen peroksida bersifat toksik terhadap sel karena bahan ini menginativasikan enzim dalam sel. Hydrogen peroksida tetrbentuk sewaktu metabolisme aerob,sehingga mikroorganisme yang tumbuh dalam lingkungan aerob harus menuraika bahn toksik tersebut. Katalase adalah salah satu enzim yang digunakan mikroorganisme untuk menguraikan hydrogen peroksida adalah peroksidase. Pada penguraian hydrogen peroksida oleh peroksidase tidak dihasilkan oksigen.
Uji katalase berguna dalam identifikasi kelompok bakteri bentuk kokus, uji katalase digunakan untukmembedaka Staphylococus dan Streptococus. Kelompopk Streptococus bersifat katalase-positif.
Penentuan adanya katalase diuji dengan larutan 3% H2O2 pada koloni terpisah. Pada bakteri yag ersifat katalase positif terlihat pembentukan gelembung udara sekitar kolon. Reasi kmiawi yang dikatalisiskan oleh enzim katalase terlihat berikut ini:
H₂O₂ H₂O + ½ O₂
Katalase                      gelembung udara
Bahan yang diperlukan :
Biakan : Streptococcus faecalis
Staphylococcus epidermidis
Larutan 3 % H2O2
Cara mengerjakan :

1. Tambahkan beberapa tetes reagens pada koloni terpisah S.epidermidis. lakukan hal yang sama dengan S.faecalis.

katalase positif ditandai oleh pembentukan gelembung udara pada koloni dan        sekitarnya.

1. Laporkan hasil pengujian

6.REDUKSI NITRAT
Beberapa organisme mampu menggunakan molekul buakan bukan oksigen sebagai akseptor electron terakhir. Bila akseptor electron terakhir ini bukan merupakn oksigen maka mikroorganisme tersebut melaksanakan respirasi anaerobic dengan menggunakan nitrat. Nitrat ini dirduksi menjadi nitrit.
Kemampua mikroorganisme mereduksi nitrat dapat digunakan sebagai cirri dalam identifikasi bakteri. Escherichia coli dan Pseudomonas aeruginosa mampu menggunakan nitrat sebagai akseptor electron terakhir. Escherichia coli mereduksinya menjadi nitrit sedangkan Pseudomonas aeruginosa mampu mereduksinya lebih lanjut menjadi N2.
Uji nitrat dilakukan dengan menumbuhkan mikroorganisme dalam kaldu nutrient yang mengandung 0,5% KNO3 dan tabung durham.setelah masa inkubasi diperhatikan adanya gas dalam tabung durham dan nitrit dalam media. Gas yang terperangkap merupakan camouran gas N2 dan CO2. gas N2 berasal dari penguraian sempurna nitrat sedangkan CO2 berasal dari respirasi anaerobic. Keberadaan nitrit dalam media dapat diuji dengan asam sulfanilat dan alphanaphtylamin. Nitrit dalam media biakan akan bereaksi dengan kedua bahan tersebut dan terlihat sebagai perubahan warna menjadi merah atau merah muda.
Alphanaphtylamin bersifat karsinogenik sehingga asam sulfanilat dan alphanaphtylamin dapat diganti dengan asam sulfamat. Asam sulfamat ( 4 gram asam sulfamat dalam 100 ml 20% H2SO4 ) dalam media yang mengandung nitrit menyebabkan pembentukan gelembung gas N2.sebagai hasil reduksi nitrat menjadi nitrit.
Bahan yang diperlukan :
Biakan :  Escherichia coli
Pseudomonas fluorescens
Staphylococcus epidermidis
Kaldu nitrat (nutrient broth yang mengndung 0,5 % KNO2)
Asam sulfanilat
Larutan alpha-naphtiamin
Cara mengerjakan :
Hari pertama

1. Beri tanda pada tabung kaldu dengannama, tanggal, dan biakan mikroorganisme yang diinokulasikan. Gunakan tabung kontrol untuk melihat pembentukan gas dalam tabung durham.
2. Inokulasikan tabung nitrat kecuali tabung kontrol.
3. Inkubasikan pada suhu 35 ⁰C.

Hari kedua

1. Perhaikan adanya petumbuhan dalam biakan kaldu yang diinokulasi; tabung konrol harus tetap bersih.
2. Perhatikan adanya pembentukan gas dalam tabung Durham.
3. Tambahkan 1 ml asam sulfanilat dan 1 ml alpha-naftilamin kedalam tabung biakan. Perhatikan adanya perubahan adanya perubahan warna setelah penambahsn reagens.perubahan warna menunjukkan bahwa nitrst direduksikan menjadi nitrit dan terjadinya proses respirasi anaerobik. Pada tabung yang tidak menunjukkan warna, tambahkan bubuk Zn untuk mwlihat reduksi nitrat menjadi amonium. Bila didapatkan nitrat dalam medium, maka kaldu berubah menjdai merah muda atau merah karena Zn mereduksi nitrat menjadi nitrit, nitrit in bereaksi dengan reagens sehingga terjadi warna merah.
4. Laporkan hasil pengujian.

7.UJI INDOL
Asam amino triptofan merupakan komponen asam amino yang lazim terdapat pada protein, sehingga asam amino ini dengan mudah dapat digunakan oleh mikroorganismeakibat penguraian protein.bakteri seperti E.coli mampu menggunakan triptofan sebagai karbon.
E.coli menghasilkan enzim triptofan yang mengkatalisikan penguraian gugus indol dan triptofan. Dalam media biaka indolmenumpuk sebagai produk buangan sedangkan sebagian lainnya dari molekul triptofan yang dapat memenuhi kebutuhan zat hara mikroorganisme.
Pembentukan indol dari triptofan oleh mikroorganismedapat diketahui dengan meumbuhksnnys dalam mdia biakan yang kaa dengan triptofan.triptofan biasanya diberikan dalam bentuk tripton.yaitu suatu polipeptida yang kaya dengan reidu tiptofan. Penumpukan indol dalam media dapat diketahui dengan penambahn berbagai reagens. Yang akan bereaksi dengan indol dan menghasilkan senyawa yang tidak larut dalam air dan berwarna merah dalam permukaan medium.
Untuk ui ini digunakan media semi padat yang kaya akan triptofan. Untuk melihat adanya indol dapat digunakan beberapa reagens yaitu Kovacs,Gore,Ehrlich.
Media untuk melihat pembentukan indol yang digunakan dilaboratorium brersfat semi padat, oleh karena itu dapat digunakan juga untuk melihatpergerakan bakteri. Jika bakteri bergeraka akan terlihat pertumbuhan disekitar tusukan dan juga permukaan media.media indol diinokulasikan dengan menusukkan jarum kedalam media semi padat.
Bahan yang diperlukan :
Biakan : E.coli
Enterobacter aerogenes
Proteus vulgaris
Biakan semi padat yang kaya triptofan.
Reagens utnuk melihat pembentukan indol
Cara mengerjakan :
Hari pertama

1. Tandai tabung dengan nama, tanggal, dan mikroorganisme yang digunakan.
2. Inokulasi biakan semi-padat dengan cara menusukkan jarum sampai pada kedalaman ¾ bagian dari permukaan media.
3. Inkubasikan pada suhu 35⁰C selama 24-48 jam.

Hari kedua

1. Tambahkan reagens Ehrlich-Bohme ke dalam biakan semi-padat. Penumpukan indol dalam media ditandai oleh warna merah pada permukaan media beberapa menit setelah penambahan reagens.
2. Gambar pertumbuhan mikroba pada media semi solid.
3. Laporkan hasil pengujian

Uji Ehrlich-Bohme
Cairan A : para-metil-benzaldehida dalam alkohol 96%
Cairan B: cairan kalium persulfat jenuh (K₂S₂O₃)
Reagens diteteskan ke ats biakan sebanyak 10-12 tetes, jika terdapat pembentukan indol akan terlihat warna merah/merah muda pada bagian atas media biakan.
8.UJI HIDROGEN SULFIDA
Banyak protein kaya akan asam amino sisitein dan methionin. Asam amino dihasilkan untuk memenuhi kebutuhan zzat hara. Adanya pengraian asam amino ditunjukan dengan adanya pembentukan asam sulfide.
Mikrooganisme yang menghasilakn asamsulfida dibiakan dalam media yang kaya dengan asam amino. Fe3+ yang terdapat dalm meia beraksi dengan H2S dan menghasilkan senyaa FeS yang berarna hitam dan tidak larut dalam air.
Produksi asam sulfide dapat terlihat dengan menggunakan media yag mengandung sulfur dan ion Fe2+
Media yang digunakan adalah TSIA (Triple Sugar Iron Agar).terutama digunakan untuk identifikasi bakteri gram negative. Media ini mengandung 3 macam gula yaitu glukosa, laktosa dan sukrosa, indicator merah fenol dan FeSO4 untuk memperlhatkan pembentukan H2S yangditunjukan dengan adanya endapan hitam. Konentrasi glukosa adalah 0,1 dari konsentrasi laktosa aatau sukrosaagar fermentasi glukosa dapatterlihatreaksi dilihat setelah 24-4 8 jam.
Reaksi yang dapat terlihat pada TSIA :

Butt bersifat asam (kuning) Slant bersifat basa (merah)	Glukosa difermentasikan
Pada seluruh media terlihat pembentukan asam. Seluruh media berwarna kuning. Pembentukan gas dibagian butt, media kadangkala terpecah	Laktosa atau sukrosa atau keduanya difermentasikan. Pembentukan gas, misalnya H2 dan CO2
Endapan hitam dibagiana butt	Pembentukan H2S
Seluruh media berwarna merah, bagian butt dan slant berwarna merah	Ketiga macam gula tidak difermentasikan

9.UJI DEKARBOKSILASE LISIN
Dekarboksilasi merupakan proses penguraian gugus karboksil dari suatu molekul organik. Proses dekarboksilasi asam amino lazimnya menghasilkan CO₂ ; molekul yang telah didekarboksilasikan digunakan dalam sebagai pemuka dalam sintesis berbagai komponen.
Proses dekarboksilasi asam amino seringkali juga digunakan untuk menetralisasikan lingkungan asam. Sewaktu proses fermentasi mikroorganisme sering menghasilkan hasil sampingan yang bersifat asam yang dapat menghambat pertumbuhan mikroorganisme. Enzim dekarbiksilase mengenyahakan gugus asam dari gugus asam amino dan menghasilkan amina yang menyebabkan media pertumbuhan bersifat basa. Proses dekarboksilasi lisin dapat diketahui dengan menumbuhkan mikroorganisme dalam biakan yang mengandung lisin. Krbohidrat yang dapat difermentasikan (glukosa) dan indicator pH untuk melihat perubahan pH. Lazimnya indicator pH yang digunakan adalah brom cresol purple (BCP). Asam yang dihasilkan dari proses fermentasi glukosa akan menurunkan pH media biakan dan menyebabkan perubahan warna dari indicator pH.dari ungu menjadi kuning. Dalam suasana asam ini proses dekarboksilasi lisin dapat berlangsung sehingga terjadi pembentukan amin yang menetralisasikan suasana asam media pertumbuhan mikroorganisme. Proses netralisasi asam ini terlihat sebagai perubahan warna dari kuning menjadi ungu seperti sediakala; perubahan warna menjadi ungu ini menunjukan bahwa lisin mengalami dekarboksilasi
Uji dekarboksilasilisin merupakan salah satu uji yang digunakan dalam pencirian mikroorganisme. Terutama yang menempati saluran pencernaan.
Bahan yang diperlukan :
Biakan : Eterobacter aerogenes
Citrobacter freudi
Kaldu dekarboksilase lisin yang mengandung lisin (LDC)
Kaldu dekarboksilase tanpa lisin (LDC)
Cara mengerjakan  :
Hari pertama

1. Beri tanda pada tabung LDC dan DC dengan nama, tanggal, dan mikroorganisme yang digunakan.
2. Innokulasi tabung LDC dan DC.
3. Lapisi media biakan yanh telah diinokulasi dengan 1 ml minyakmineral yang telah disterilkan. Gunakan ipet pasteur untuk mengalirkan minyak kedalam tabung. Perhatikan bahwa ujung pipet tidak menyentuh media biakan yang telah diinokulasi.
4. Inkubasi pada suhu 35⁰C selama 48 jam.

Hari kedua

1. Perhatikan adanya perubahan warna dalam media biakan. Dekarboksilasi lisin ditunjukan oleh warna ungu dalam kaldu LDC dan warna kuning tabung DC. Bila tabung LDC  berwarna kuning, maka lisin mungkin tidak dikarboksilasikan. Bila tabung LDC dan DC berwarna ungu , maka lisin tidak diddkarboksilasikan, karena mikroorganisme ttidak menghasilkan asam dari fermentasi glukosa enzim dekarboksilase lisin tidak diaktivasikan. Kadangkala mikroorganisme dapat mereduksikan BCP sehingga terjadi perubahan warna dari ungu menjdai tidak berwarna. Perubahan warna media ini harus diukur dengan menggunakan kertas indikator pH.
2. Laporkan hasil pengujian.

10.UJI IMVIC
Untuk membedakan Enterobacter aerogenes dan Escherichia coli dilakukan Uji IMVIC yang terdiri dari uji-uji : Indol-Methyl red-Voges Proskeur-Citrat.
Kedua mikroorganisme tersebut akan memberikan hasil sebagai berikut :
I   M   Vi   C
E. coli +   +     -     -
A. aerogenes -    -      +    +
11.HIDROLISIS GELATIN
Gelatin adalah protein yang diperoleh sewaktu mereus tulang, tulang rawan atau tenunan ikat hewani lainnya. Protein ini bila didinginkan membentuk gel, mikroorganisme tertentu mampu menguraikan molekul sehingga asam amino yang dihasilkan dapat digunakn sebagi zat hara. Hidrolisis gelatin oleh mikroorganisme dikatalisis oeh eksoenzim yang disebut gelatinase. Gelatin yang telah dicerna tidak mampu membentuk gel dan bersifatcair. Kemampuan untuk mencernakan gelatin dapat digunakan dalam penirian mikroorgansme. Sebagai contoh Serratia marcecens dapat dibedakan dari Klebsiella pneumonia atau E. coli berdasarkan kemampuan mencernakan gelatin untuk mengetahui sifatpatogen galur mukrooranisme karena sering kali dikaitkan engan produksi enzim untuk menguraikan bahan pengikat, tenunan untuk memudahkan penyebaran mikroorganisme.
Dalam laboratorium, pencairan gelatin di uji dengan cara menusukkan mikroorganisme yang akan di uji ke dalam media semi padat yang mengandung nutrient broth dan gelatin. Media ii di inkubasi dan di amati kemampuan mikroorganisme mencairkan glatin. Pada suhu 350C, gelatin dapat mencairjika di iokulasi dengan mikroorganime yang mamou maupun yang tidak mampu mencairkan gelatin. Berdasarkan hal tersebut gelatin harus di masukkan dalam lemari es selam 30 menit untuk mengetahui kemampuan mikroorganisme mencairkan gelatin. Bila mikroorganisme mampumencerna gelatin, maka meia semi padat tetap bersifat cair Setelah dikeluarkan dari lemari es. Sebaliknya bila mikrooranisme tidak mampu mencerna gelatin maka media semi padat gelatin membeku kembali setelah dikeluarkan dari lemari es.
Bahan yang diperlukan :
Biakan : Escheria coli
Bacillus subtilis
Seratina marcesccens
Media biakan gelatin
Cara mengerjakan :
Hari pertama

1. Tandai tabung dengan gelatin dengan nama, tanggal, dan mikroorganisme yang diiujikan.
2. Media diinokulasi dengan cara menusukan mikoorganisme yang diujikan sedalam ¾ bagian dari lapisan permukaan.
3. Inkubasikan pada suhu 35⁰C selama 24 jam.

Hari kedua

1. Amati petumbuhan dalam media gelatin, kemudian masukkan tabung dalam lemari es selama 30 menit.
2. Amati pencairan gelatin setelah dikeluarkan dari lemari es. Pancairan gelatin dapat dilihat dengan memiringkan tabung. Bila gelatin tetap dalam keadaan cair, maka mikroorganisme mampu mencernakan atau menghidrolisiskan gelatin. Beberapa mikroorganisme mampu mencernakan gelatin namun memerlukan waktu yang lama. Ini berarti bahwa medium gelatin harus diinkubasikan kembali selama 1 minggu sebelum dapat dinyatakan bahwa hasil pengujian bersifat negatif
3. laporkan hasil pengujian.

12. HIDROLISIS UREA
Beberapa mikroorganisme mampu menhasilkan urease yang menguraikan urea menjadi ammonium dan CO2.aktifitas enzim urease ini dapat diamati dengan menumbuhkan mikroorganisme dalam media biakan yang mengandung urea dan indicator pH (biasanya phenol red).Bila urea dihidrolisiskan,NH4+ terakumulasi dalam media biakan dan menyebabkan pH media menjadoi basa. Perubahan warna dari merah – jingga menjadi merah unggu merupalkan petunjuk terjadinya hidrolisis urea.
Urea bersipat labil,sehingga media urea tidak dapat disterilisasikan dengan autoklaf.sterilisasi dilakukan dengan filtrasi.
Bahan yang diperlukan :
Biakan : Escherichia coli
Proteus vulgaris
Media biakan agar urea (miring)
Cara mengerjakan :
Hari pertama

1. Tandai tabung dengan nama, tanggal dan mikroorganisme yang diuji.
2. Inokulasi agar miring dengan mikroorganisme.
3. Inkubasi pada suhu 35 ⁰C selama 48 jam.

Hari kedua

1. Amati perubahan warna dari merah jingga menjadi merah ungu. Nila perubahan warna sulit diamati karena pertumbuhan yang subur pada permukaan agar miring, bandingkan bagian “slant” dengan bagian “butt”.
2. Laporkan hasil pengujian.

13.PENGGUNAAN SITRAT
Uji sitrat digunakan untuk melihat kemampuan mikroorganisme menggunakan sitra sebagai satu-satunya sumber karbon dan energi. Untuk uji ini dapat digunakan medium sitrat-koser berupa meium cair atau sitrat-simon berupa medium padat. Yaitu merupakan medium sintetik dengan na sitrat sebagi satu-satunya sumber karbon, NH4+  sebagai sumber N dan brom thymol blue sebagai indicator pH, sedangkan medium sitrat koser tidak mengandung indicator. Bila mikroorganisme mampu menggunakan sitra maka asam akan dihilangkan dari medium biakan sehingga meningkatkan pH dan mengubah warna medium dari hijau menadi biru. Perubahan warna dari hijau menjadi biru menunjukan bahwa mikroorganisme mampu menggunakan sitrat sebagi sumber karbon. Edangkan padamedium sitrat kser kemampuan mengguanakan sitrat ditunjukan oleh kekeruhan yang menandakan adanya pertumbuhan.
Bahan yang diperlukan :
Biakan : Escherichia coli
Enterobacter aerogenes
Proteus vulgaris
Pseudomonas aeruginosa
Media biakan Simmons citrate agar
Cara mengerjakan :
Hari pertama

1. Tandai tabung Simmon’s citrate agar dengan nama, tanggal, dan nama mikroorganisme yang diuji.
2. Inokulasi tabung agar dengan inokulum yang tipis.inokulum yang tebal kadangkala menyebabkan mikroorganisme seakan-akan dapat tumbuh dalam Simmon’s citrate agar, sehingg hasil pengujian dapat memberikan hasil yang tidak benar.
3. Inkubasi pada suhu 35 ⁰C selama 48 jam.

Hari kedua

1. Perhatikan perubahan warna dengan melihat pertumbuhan dan perubahan warna dari hijau ke biru.
2. Laporkan hsil pengujian.

BAB IV

MINIMUM INHIBITORY CONCENTRATE (MIC) Dan
MINIMUM KILLING CONCENTRATE (MKC)

Faktor-Faktor yang Mempengaruhi Aktivitas Mikroba
1) Faktor-faktor Fisik

1. Pengaruh Temperature

Temperatur  merupakan salah satu faktor yang penting di dalam kehidupan. Beberapa jenis mikroba dapat hidup di daerah temperatur yang luas sedang jenis lainnya pada daerah yang terbatas. Pada umumnya batas daerah tempetur bagi kehidupan mikroba terletak di antara 0^oC dan 90^oC, sehingga untuk masin -masing mikroba dikenal nilai temperatur minimum, optimum dan maksimum. Temperatur minimum suatu jenis mikroba ialah nilai paling rendah dimana kegiatan mikroba asih berlangsung. Temperatur optimum adalah nilai yang paling sesuai /baik untuk kehidupan mikroba. Temperatur maksimum adalah nilai tertinggi yang masih dapat digunakan untuk aktivitas mikroba tetapi pada tingkatan kegiatan fisiologi yang paling minimal.
Daya tahan mikroba terhadap temperatur tidak sama untuk tiap-tiap spesies. Ada spesies yng mati setelah mengalami pemanasan beberapa menit didalam medium pada temperature 60^oC; sebaliknya bakteri yang membentuk spora seperti genus Bacillus dan genus Clostridium tetap hidup setelah dipanasi dengan uap 100^oC atau lebih selama 30 menit. Oleh karena itu, proses sterilisasi untuk membunuh setiap spesies bakteri yakni dengan pemanasan selama 15-20 menit dengan tekanan 1 atm dan temperatur 121^oC di dalam otoklaf.
Mengenai pH medium kenapa berpengaruh terhadap daya tahan mikroba terhadap pemanasan bahwa sedikit perubahan pH menuju asam atau basa sangat berpengaruh terhadap pemanasan. Sehubungan dengan hal ini, maka buah-buahan yang masam lebih mudah disterilkan dari pada sayur mayur atau daging.
Golongan bakteri yang dapat hidup pada batas-batas temperature yang sempit, misalnya Gonococcus yang hanya dapat hidup pada kisaran 30-40^oC. golongan mikroba yang memiliki batas temperatur minimum dan maksimum tidak telalu besar, disebut stenotermik. Tetapi Escherichia coli tumbuh pada kisaran temperatur 8-46^oC, sehingga beda (rentang) antara temperatur minimum besar, inilah yang disebut golongan euritermik. Bila mikroba dipiara dibawah temperatur minimum atau sedikit diatas temperatur maksimum tidak segera mati, melainkan dalam keadaan dormansi (tidur).
Berdasarkan daerah aktivitas temperatur, mikroba di bagi menjadi 3 golongan, yaitu:

1. Mikroba psirkofilik (kryofilik) adalah golongan mikroba yang dapat tumbuh pada daerah temperatur antara 0 C sampai 30 C, dengan temperatur optimum 15 C. kebanyakan golongan ini tumbuh d tempat-tempat dingin, baik di daratan maupun di lauatan.
2. Mikroba mesofilik adalah golongan mikroba yang mempunyai temperatur optimum pertumbuhan antara 25 C-37 C minimum 15 C dan maksimum di sekitar 55 C. umumnya  hidup di dalam alat pencernaan, kadang-kadang ada juga yang dapat hidup dengan baik pada temperatur 40 C atau lebih.
3. Mikroba termofilik adalah golongan mikroba yang dapat tumbuh pada daerah temperature tinngi, optimum 55 C-60 C, minmum 40 C, sedangkan maksimum 75 C. golongan ini terutama terdapat di dalam sumber-sumber air panas dan tempat-tempat lain yang bertemperatur lebih tinggi dari 55 C.

Temperatur tinggi melebihi temperatur maksimum akan menyebabkan denaturasi protein dan enzim. Hal ini akan menyebabkan terhentinya metabolisme. Dengan nilai temperatur yang melebihi maksimum, mikroba akan mengalami kematian. Titik kematian termal suatu jenis mikroba (Thermal Death Point) adalah nilai temperatur serendah-rendahnya yang dapat mematikan jenis mikroba yang berada dalam medium standar selama 10 menit dalam kondisi tertentu. Laju kematian termal (thermal Deat Rate) adalah kecepatan kematian mikroba akibat pemberian temperatur. Hal ini karena tidak semua spesies mati bersama-sama pada suatu temperatur  tertentu. Biasanya, spesies yang satu lebih tahan dari pada yang lain terhadap suatu pemanasan, oleh karena itu masing-masing spesies itu ada angka kematian pada suatu temperatur. Waktu kematian temal (Thermal Death Time) merupakan waktu yang diperlukan untuk membunuh suatu jenis mikroba pada suatu temperatur yang tetap.
Faktor-faktor yang mempengaruhi titik kematian termal antara lain ialah waktu, temperatur, kelembaban, bentuk dan jenis spora, umur mikrroba, pH dan komposisi medium. Contoh waktu kematian thermal (TDT/ thermal death time) untu bakteri E. coli yaitu dalam  jangka waktu 20-30 menit dan suhu 57⁰C.

1. Kelembaban dan Pangaruh Kebasahan serta Kekeringan

Mikroba mempunyai nilai kelembaban optimum. Pada umumnya untuk pertumbuhan ragi dan bakteri diperlukan kelembaban yang tinggi di atas 85%, sedangkan untuk jamur di perlukan kelembaban yang rendah dibawah 80%. Banyak mikroba yang tahan hidup di dalam keadaan kering untuk waktu yang lama, seperti dalam bentuk spora, konidia, artospora, klamidospora dan kista.
Setiap mikroba memerlukan kandungan air bebas tertentu untuk hidupnya, biasanya diukur dengan parameter aw (water activity) atau kelembaban relatif. Mikroba umumnya dapat tumbuh pada aw 0,998-0,6. bakteri umumnya memerlukan aw 0,90- 0,999. Mikroba yang osmotoleran dapat hidup pada aw terendah (0,6) misalnya khamir Saccharomyces rouxii. Aspergillus glaucus dan jamur benang lain dapat tumbuh pada aw 0,8. Bakteri umumnya memerlukan aw atau kelembaban tinggi lebih dari 0,98, tetapi bakteri halofil hanya memerlukan aw 0,75. Mikroba yang tahan kekeringan adalah yang dapat membentuk spora, konidia atau dapat membentuk kista.
Bakteri sebenarnya mahluk yang suka akan keadaan basah, bahkan dapat hidup di dalam air. Hanya di dalam air yang tertutup mereka tak dapat hidup subur; hal ini di sebabkan karena kurangnya udara bagi mereka. Tanah yang cukup basah baiklah bagi kehidupan bakteri. Banyak bakteri menemui ajalnya, jika kena udara kering. Meningococcus, yaitu bakteri yang menyebabkan meningitis, itu mati dalam waktu kurang daripada satu jam, jika digesekkan di atas kaca obyek. Sebaliknya,spora-spora bakteri dapat bertahan beberapa tahun dalam keadaan kering.
Pada proses pengeringan, air akan menguap dari protoplasma. Sehingga kegiatan metabolisme berhenti. Pengeringan dapat juga merusak protoplasma dan mematikan sel. Tetapi ada mikrobia yang dapat tahan dalam keadaan kering, misalnya mikrobia yang membentuk spora dan dalam bentuk kista. Adapun syarat-syarat yang menentukan matinya bakteri karena kekeringan itu ialah:

• Bakteri yang ada dalam medium susu, gula, daging kering dapat bertahan lebih lama daripada di dalam gesekan pada kaca obyek. Demikian pula efek kekeringan kurang terasa, apabila bakteri berada di dalam sputum ataupun di dalam agar-agar yang kering.
• Pengeringan di dalam terang itu pengaruhnya lebih buruk daripada pengeringan di dalam gelap.
• Pengeringan pada suhu tubuh (37°C) atau suhu kamar (+ 26 °C) lebih buruk daripada pengeringan pada suhu titik-beku.
• Pengeringan di dalam udara efeknya lebih buruk daripada pengeringan di dalam vakum ataupun di dalam tempat yang berisi nitrogen. Oksidasi agaknya merupakan faktor-maut.

1. Pengaruh Perubahan Nilai Osmotik

Tekanan osmose sebenarnya sangat erat hubungannya dengan kandungan air. Apabila mikroba diletakkan pada larutan hipertonis, maka selnya akan mengalami plasmolisis, yaitu terkelupasnya membran sitoplasma dari dinding sel akibat mengkerutnya sitoplasma. Apabila diletakkan pada larutan hipotonis, maka sel mikroba akan mengalami plasmoptisa, yaitu pecahnya sel karena cairan masuk ke dalam sel, sel membengkak dan akhirnya pecah.
Berdasarkan tekanan osmose yang diperlukan dapat dikelompokkan menjadi (1) mikroba osmofil, adalah mikroba yang dapat tumbuh pada kadar gula tinggi, (2) mikroba halofil, adalah mikroba yang dapat tumbuh pada kadar garam halogen yang tinggi, (3) mikroba halodurik, adalah kelompok mikroba yang dapat tahan (tidak mati) tetapi tidak dapat tumbuh pada kadar garam tinggi, kadar garamnya dapat mencapai 30 %.
Contoh mikroba osmofil adalah beberapa jenis khamir. Khamir osmofil mampu tumbuh pada larutan gula dengan konsentrasi lebih dari 65 % wt/wt (aw = 0,94). Contoh mikroba halofil adalah bakteri yang termasuk Archaebacterium, misalnya Halobacterium. Bakteri yang tahan pada kadar garam tinggi, umumnya mempunyai kandungan KCl yang tinggi dalam selnya. Selain itu bakteri ini memerlukan konsentrasi Kalium yang tinggi untuk stabilitas ribosomnya. Bakteri halofil ada yang mempunyai membran purple bilayer, dinding selnya terdiri dari murein, sehingga tahan terhadap ion Natrium.

1. Kadar Ion Hidrogen (pH)

Mikroba umumnya menyukai pH netral (pH 7). Beberapa bakteri dapat hidup pada pH tinggi (medium alkalin). Contohnya adalah bakteri nitrat, rhizobia, actinomycetes, dan bakteri pengguna urea. Hanya beberapa bakteri yang bersifat toleran terhadap kemasaman, misalnya Lactobacilli, Acetobacter, dan Sarcina ventriculi. Bakteri yang bersifat asidofil misalnya Thiobacillus. Jamur umumnya dapat hidup pada kisaran pH rendah. Apabila mikroba ditanam pada media dengan pH 5 maka pertumbuhan didominasi oleh jamur, tetapi apabila pH media 8 maka pertumbuhan didominasi oleh bakteri. Berdasarkan pH-nya mikroba dapat dikelompokkan menjadi 3 yaitu (a) mikroba asidofil, adalah kelompok mikroba yang dapat hidup pada pH 2,0-5,0, (b) mikroba mesofil (neutrofil), adalah kelompok mikroba yang dapat hidup pada pH 5,5-8,0, dan (c) mikroba alkalifil, adalah kelompok mikroba yang dapat hidup pada pH 8,4-9,5.
Contoh pH minimum, optimum, dan maksimum untuk beberapa jenis bakteri adalah sebagai berikut :

Nama Mikroba	pH
	Minimum	Optimum	Maksimum
Escherichia coli	4,4	6,6-7,0	9,0
Proteus vulgaris	4,4	6,6-7,0	8,4
Enterobacter aerogenes	4,4	6,6-7,0	9,0
Pseudomonas aeruginosa	5,6	6,6-7,0	8,0
Clostridium sporogenes	5,0-5,8	6,0-7,6	8,5-9,0
Nitrosomonas spp	7,0-7,6	8,0-8,8	9,4
Nitrobacter spp	6,6	7,6-8,6	10,0
Thiobacillus Thiooxidans	1,0	2,0-2,8	4,0-6,0
Lactobacillus acidophilus	4,0-4,6	5,8-6,6	6,8

Untuk menumbuhkan mikroba pada media memerlukan pH yang konstan, terutama pada mikroba yang dapat menghasilkan asam. Misalnya Enterobacteriaceae dan beberapa Pseudomonadaceae. Oleh karenanya ke dalam medium diberi tambahan buffer untuk menjaga agar pH nya konstan. Buffer merupakan campuran garam mono dan dibasik, maupun senyawa-senyawa organik amfoter. Sebagai contoh adalah buffer fosfat anorganik dapat mempertahankan pH diatas 7,2. Cara kerja buffe adalah garam dibasik akan mengadsorbsi ion H⁺ dan garam monobasik akan bereaksi dengan ion OH^-.

1. Tegangan Permukaan

Tegangan muka mempengaruhi cairan sehingga permukaan cairan tersebut menyerupai membran yang elastis. Seperti telah diketahui protoplasma mikroba terdapat di dalam sel yang dilindungi dinding sel, maka apabilaada perubahan tegangan muka dinding sel akan mempengaruhi pula permukaan protoplasma. Akibat selanjutnya dapat mempengaruhi pertumbuhan mikroba dan bentuk morfologinya. Zat-zat seperti sabun, deterjen, dan zat-zat pembasah (surfaktan) seperti Tween80 dan Triton A20 dapat mengurangi tegangan muka cairan/larutan. Umumnya mikroba cocok pada tegangan muka yang relatif tinggi.

1. Tekanan Hidrostatik

Tekanan hidrostatik mempengaruhi metabolisme dan pertumbuhan mikroba. Umumnya tekanan 1-400 atm tidak mempengaruhi atau hanya sedikit mempengaruhi metabolisme dan pertumbuhan mikroba. Tekanan hidrostatik yang lebih tinggi lagi dapat menghambat atau menghentikan pertumbuhan, oleh karena tekanan hidrostatik tinggi dapat menghambat sintesis RNA, DNA, dan protein, serta mengganggu fungsi transport membran sel maupun mengurangi aktivitas berbagai macam enzim. Tekanan diatas 100.000 pound/inchi2 menyebabkan denaturasi protein. Akan tetapi ada mikroba yang tahan hidup pada tekanan tinggi (mikroba barotoleran), dan ada mikroba yang tumbuh optimal pada tekanan tinggi sampai 16.000 pound/inchi2 (barofil). Mikroba yang hidup di laut dalam umumnya adalah barofilik atau barotoleran. Sebagai contoh adalah bakteri Spirillum.

1. Pengaruh Sinar

Kebanyakan bakteri tidak dapat mengadakan fotosintesis, bahkan setiap radiasi dapat berbahaya bagi kehidupannya. Sinar yang nampak oleh mata kita, yaitu yang bergelombang antara 390 m μ sampai 760 m μ, tidak begitu berbahaya; yang berbahaya ialah sinar yang lebih pendek gelombangnya, yaitu yang bergelombang antara 240 m μ sampai 300 m μ. Lampu air rasa banyak memancarkan sinar bergelombang pendek ini. Lebih dekat, pengaruhnya lebih buruk. Dengan penyinaran pada jarak dekat sekali, bakteri bahkan dapat mati seketika, sedang pada jarak yang agak jauh mungkin sekali hanya pembiakannya sajalah yang terganggu. Spora-spora dan virus lebih dapat bertahan terhadap sinar ultra-ungu. Sinar ultra-ungu biasa dipakai untuk mensterilkan udara, air, plasma darah dan bermacam-macam bahan lainya. Suatu kesulitan ialah bahwa bakteri atau virus itu mudah sekali ketutupan benda-benda kecil, sehingga dapat terhindar dari pengaruh penyinaran. Alangkah baiknya, jika kertas-kertas pembungkus makanan, ruang-ruang penyimpan daging, ruang-ruang pertemuan, gedung-gedung bioskop dan sebagainya pada waktu-waktu tertentu dibersihkan dengan penyinaran ultra-ungu.
2) Faktor-faktor Kimia

1. Fenol Dan Senyawa-Senyawa Lain Yang Sejenis

Larutan fenol 2 sampai 4% berguna bagi desinfektan. Kresol atau kreolin lebih baik khasiatnya daripada fenol. Lisol ialah desinfektan yang berupa campuran sabun dengan kresol; lisol lebih banyak digunakan daripada desinfektan-desinfektan yang lain. Karbol ialah lain untuk fenol. Seringkali orang mencampurkan bau-bauan yang sedap, sehingga desinfektan menjadi menarik.

1. Formaldehida (CH₂O)

Suatu larutan formaldehida 40% biasa disebut formalin. Desinfektan ini banyak sekali digunakan untuk membunuh bakteri, virus, dan jamur. Formalin tidak biasa digunakan untuk jaringan tubuh manusia, akan tetapi banyak digunakan untuk merendam bahanbahan laboratorium, alat-alat seperti gunting, sisir dan lain-lainnya pada ahli kecantikan.

1. Alkohol

Etanol murni itu kurang daya bunuhnya terhadap bakteri. Jika dicampur dengan air murni, efeknya lebih baik. Alcohol 50 sampai 70% banyak digunakan sebagai desinfektan.

1. Yodium

Yodium-tinktur, yaitu yodium yang dilarutkan dalam alcohol, banyak digunakan orang untuk mendesinfeksikan luka-luka kecil. Larutan 2 sampai 5% biasa dipakai. Kulit dapat terbakar karenanya , oleh sebab itu untuk luka-luka yang agak lebar tidak digunakan yodium-tinktur.

1. Klor Dan Senyawa Klor

Klor banyak digunakan untuk sterilisasi air minum. Persenyawaan klor dengan kapur atau natrium merupakan desinfektan yang banyak dipakai untuk mencuci alat-alat makan dan minum.

1. Zat Warna

Beberapa macam zat warna dapat menghambat pertumbuhan bakteri. Pada umumnya bakteri gram positif iktu lebih peka terhadap pengaruh zat warna daripada bakteri gram negative. Hijau berlian, hijau malakit, fuchsin basa, kristal ungu sering dicampurkan kepada medium untuk mencegah pertumbuhanbakteri gram positif. Kristal ungu juga dipakai untuk mendesinfeksikan luka-luka pada kulit. Dalam penggunaan zat warna perlu diperhatikan supaya warna itu tidak sampai kena pakaian.

1. Obat Pencuci (Detergen)

Sabun biasa itu tidak banyak khasiatnya sebagai obat pembunuh bakteri, tetapi kalau dicampur dengan heksaklorofen daya bunuhnya menjadi besar sekali. Sejak lama obat pencuci yang mengandung ion (detergen) banyak digunakan sebagai pengganti sabun. Detergen bukan saja merupakan bakteriostatik, melainkan juga merupakan bakterisida. Terutama bakteri yang gram positif itu peka sekali terhadapnya. Sejak 1935 banyak dipakai garam amonium yang mengandung empat bagian. Persenyawaan ini terdiri atas garam dari suatu basa yang kuat dengan komponen-komponen. Garam ini banyak sekali digunakan untuk sterilisasi alat-alat bedah, digunakan pula sebagai antiseptik dalam pembedahan dan persalinan, karena zat ini tidak merusak jaringan, lagipula tidak menyebabkan sakit. Sebagai larutan yang encer pun zat ini dapat membunuh bangsa jamur, dapat pula beberapa genus bakteri Gram positif maupun Gram negatif. Agaknya alkil-dimentil bensil-amonium klorida makin lama makin banyak dipakai sebagai pencuci alat-alat makan minum di restoran-restoran. Zat ini pada konsentrasi yang biasa dipakai tidak berbau dan tidak berasa apa-apa.

1. Sulfonamida

Sejak 1937 banyak digunakan persenyawaan-persenyawaan yang mengandung belerang sebagai penghambat pertumbuhan bakteri dan lagi pula tidak merusak jaringan manusia. Terutama bangsa kokus seperti Streptococcus yang menggangu tenggorokan, Pneumococcus, Gonococcus, dan Meningococcus sangat peka terhadap sulfonamida. Penggunaan obat-obat ini, jika tidak aturan akan menimbulkan gejalagejala alergi, lagi pula obat-obatan ini dapat menimbulkan golongan bakteri menjadi kebal terhadapnya. Khasiat sulfonamida itu terganggu oleh asam-p-aminobenzoat. Asam-p-aminobenzoat memegang peranan sebagai pembantu enzim-enzim pernapasan, dalam hal itu dapat terjadi persaingan antara sulfanilamide dan asam-paminobenzoat. Sering terjadi, bahwa bakteri yang diambil dari darah atau cairan tubuh orang yang habis diobati dengan sulfanilamide itu tidak dapat dipiara di dalam medium biasa. Baru setelah dibubuhkan sedikit asam-p-aminobenzoat ke dalam medium tersebut, bakteri dapat tumbuh biasa. Berikut ialah rumus bangun sulfonamide dan asam-p-aminobenzoat.

1. Antibiotik

Antibiotik yang pertama dikenal ialah pinisilin, yaitu suatu zat yang dihasilkan oleh jamur Pinicillium. Pinisilin di temukan oleh Fleming dalam tahun 1929, namun baru sejak 1943 antibiotik ini banyak digunakan sebagai pembunuh bakteri. Selama Perang Dunia Kedua dan sesudahnya bermacam-macam antibiotik diketemukan, dan pada dewasa ini jumlahnya ratusan. Genus Streptomyces menghasilkan streptomisin, aureomisin, kloromisetin, teramisin, eritromisin, magnamisin yang masing-masing mempunyai khasiat yang berlainan. Akhir-akhir ini orang telah dapat membuat kloromisetin secara sintetik, obat-obatan ini terkenal sebagai kloramfenikol. Diharapkan antibiotik-antibiotik yang lain pun dapat dibuat secara sintetik pula.
Ada yang kita kenal beberapa antibiotik yang dapat dihasilkan oleh golongan jamur, melainkan oleh golongan bakteri sendiri, misalnya tirotrisin dihasilkan oleh Bacillus brevis, basitrasin oleh Bacillus subtilis, polimiksin oleh Bacillus polymyxa.Antibiotik yang efektif bagi banyak spesies bakteri, baik kokus, basil, maupun spiril, dikatakan mempunyai spektrum luas. Sebaliknya, suatu antibiotik yang hanya efektif untuk spesies tertentu, disebut antibiotik yang spektrumnya sempit. Pinisilin hanya efektif untuk membrantas terutama jenis kokus, oleh karena itu pinisilin dikatakan mempunyai spektrum yang sempit. Tetrasiklin efektif bagi kokus, basil dan jenis spiril tertentu, oleh karena itu tetrasiklin dikatakan mempunyai spektrum luas. Sebelum suatu antibiotik digunakan untuk keperluan pengobatan, maka perlulah terlebih dahulu antibiotik itu diuji efeknya terhadap spesies bakteri tertentu.

1. Garam – Garam Logam

Garam dari beberapa logam berat seperti air raksa dan perak dalam jumlah yang kecil saja dapat menumbuhnkan bakteri, daya mana disebut oligodinamik. Hal ini mudah sekali dipertunjukkan dengan suatu eksperimen.
Sayang benar garam dari logam berat itu mudah merusak kulit, maka alat-alat yang terbuat dari logam, dan lagi pula mahal harganya. Meskipun demikian orang masih bisa menggunakan merkuroklorida (sublimat) sebagai desinfektan. Hanya untuk tubuh manusia lazimnya kita pakai merkurokrom, metafen atau mertiolat. ONa HgOH SHgCH₂.CH₃ CH₃ NO₃ COONa metafen mertiolat
Persenyawaan air rasa yang organik dapat pula dipergunakan untuk membersihkan biji – bijian supaya terhindar dari gangguan bangsa jamur. Nitrat perak 1 sampai 2% banyak digunakan untuk menetesi selaput lendir, misalnya pada mata bayi yang baru lahir untuk mencegah gonorhoea. Banyak juga orang mempergunakan persenyawaan perak dengan protein. Garam tembaga jarang dipakai sebagai bakterisida, akan tetapi banyak digunakan untuk menyemprot tanaman dan untuk mematikan tumbuhan ganggang di kolam-kolam renang.
3) Faktor-faktor Biologi

1. Netralisme

Netralisme adalah hubungan antara dua populasi yang tidak saling mempengaruhi. Hal ini dapat terjadi pada kepadatan populasi yang sangat rendah atau secara fisik dipisahkan dalam mikrohabitat, serta populasi yang keluar dari habitat alamiahnya. Sebagai contoh interaksi antara mikroba allocthonous (nonindigenous) dengan mikroba autochthonous (indigenous), dan antar mikroba nonindigenous di atmosfer yang kepadatan populasinya sangat rendah. Netralisme juga terjadi pada keadaan mikroba tidak aktif, misal dalam keadaan kering beku, atau fase istirahat (spora, kista).

1. Komensalisme

Hubungan komensalisme antara dua populasi terjadi apabila satu populasi diuntungkan tetapi populasi lain tidak terpengaruh. Contohnya adalah:
-  Bakteri Flavobacterium brevis dapat menghasilkan ekskresi sistein. Sistein dapat digunakan oleh Legionella pneumophila.
- Desulfovibrio mensuplai asetat dan H₂ untuk respirasi anaerobic Methanobacterium.

1. Sinergisme

Suatu bentuk asosiasi yang menyebabkan terjadinya suatu kemampuan untuk dapat melakukan perubahan kimia tertentu di dalam substrat. Apabila asosiasi melibatkan 2 populasi atau lebih dalam keperluan nutrisi bersama, maka disebut sintropisme. Sintropisme sangat penting dalam peruraian bahan organik tanah, atau proses pembersihan air secara alami.

1. Mutualisme (Simbiosis)

Mutualisme adalah asosiasi antara dua populasi mikroba yang keduanya saling tergantung dan sama-sama mendapat keuntungan. Mutualisme sering disebut juga simbiosis. Simbiosis bersifat sangat spesifik (khusus) dan salah satu populasi anggota simbiosis tidak dapat digantikan tempatnya oleh spesies lain yang mirip. Contohnya adalah Bakteri Rhizobium sp. yang hidup pada bintil akar tanaman kacang-kacangan. Contoh lain adalah Lichenes (Lichens), yang merupakan simbiosis antara algae sianobakteria dengan fungi. Algae (phycobiont) sebagai produser yang dapat menggunakan energi cahaya untuk menghasilkan senyawa organik. Senyawa organik dapat digunakan oleh fungi (mycobiont), dan fungi memberikan bentuk perlindungan (selubung) dan transport nutrien / mineral serta membentuk faktor tumbuh untuk algae.

1. Kompetisi

Hubungan negatif antara 2 populasi mikroba yang keduanya mengalami kerugian. Peristiwa ini ditandai dengan menurunnya sel hidup dan pertumbuhannya. Kompetisi terjadi pada 2 populasi mikroba yang menggunakan nutrien / makanan yang sama, atau dalam keadaan nutrien terbatas. Contohnya adalah antara protozoa Paramaecium caudatum dengan Paramaecium aurelia.

1. Amensalisme (Antagonisme)

Satu bentuk asosiasi antar spesies mikroba yang menyebabkan salah satu pihak dirugikan, pihak lain diuntungkan atau tidak terpengaruh apapun. Umumnya merupakan cara untuk melindungi diri terhadap populasi mikroba lain. Misalnya dengan menghasilkan senyawa asam, toksin, atau antibiotika. Contohnya adalah bakteri Acetobacter yang mengubah etanol menjadi asam asetat. Thiobacillus thiooxidans menghasilkan asam sulfat. Asam-asam tersebut dapat menghambat pertumbuhan bakteri lain. Bakteri amonifikasi menghasilkan ammonium yang dapat menghambat populasi Nitrobacter.

1. Parasitisme

Parasitisme terjadi antara dua populasi, populasi satu diuntungkan (parasit) dan populasi lain dirugikan (host / inang). Umumnya parasitisme terjadi karena keperluan nutrisi dan bersifat spesifik. Ukuran parasit biasanya lebih kecil dari inangnya. Terjadinya parasitisme memerlukan kontak secara fisik maupun metabolik serta waktu kontak yang relatif lama. Contohnya adalah bakteri Bdellovibrio yang memparasit bakteri E. coli. Jamur Trichoderma sp. memparasit jamur Agaricus sp.

1. Predasi

Hubungan predasi terjadi apabila satu organisme predator memangsa atau memakan dan mencerna organisme lain (prey). Umumnya predator berukuran lebih besar dibandingkan prey, dan peristiwanya berlangsung cepat. Contohnya adalah Protozoa (predator) dengan bakteri (prey).













BAB V

OLIGODINAMIK

A.Pengertian dan Jenis Disinfektan
Zat antimikroba adalah senyawa yang dapat membunuh atau menghambat
pertumbuhan mikroorganisme. Zat antimikroba dapat bersifat membunuh mikroorganisme
(microbicidal) atau menghambat pertumbuhan mikroorganisme (microbiostatic).
Disinfektan yaitu suatu senyawa kimia yang dapat menekan pertumbuhan
mikroorganisme pada permukaan benda mati seperti meja, lantai dan pisau bedah.
Adapun antiseptik adalah senyawa kimia yang digunakan untuk menekan
pertumbuhan mikroorganisme pada jaringan tubuh, misalnya kulit. Efisiensi dan
efektivitas disinfektan dipengaruhi oleh beberapa faktor yaitu:

• Konsentrasi
• Waktu terpapar
• Jenis mikroba
• Kondisi lingkungan: temperatur, pH dan jenis tempat mikroba hidup

Beberapa jenis disinfektan diantaranya adalah:
v
Pengujian zat disinfektan dengan kertas cakram
Cara kerja :
Inokulasikan E. coli dan Bacillus sp. Pada NA cawan sengan streak kontinyu.
Kertas cakram steril dicelupkan ke dalam larutan disinfektan (alkohol 70%,
LysoI 5%, betadin, dan hipoklorit 5%). Setelah diangkat, sisa tetes larutan yang
berlebihan pada kertas cakram diulaskan pada dinding wadah karena
dikhawatirkan larutan akan meluas di permukaan agar jika larutan terlalu
banyak.
Kertas cakram diletakkan dipermukaan agar dengan pinset. Tekan dengan
pinset supaya kertas cakram benar-benar menempel pada agar.
Inkubasi selama 48 jam pada 37 0C.
Zona hambat yang terbentuk diukur diameternya, bandingkan daya kerja
berbagai disinfektan.
Pengujian pengaruh daya oligodinamik
Logam-logam berat seperti Hg, Cu, Ag dan Pb bersifat racun terhadap sel
meskipun hanya dalam kadar rendah. Logam mengalami ionisasi dan ion-ion tersebut
bereaksi dengan bagian sulfihidril pada protein sel sehingga menyebabkan
denaturasi. Daya hambat atau mematikan dari logam dengan konsentrasi yang rendah
disebut daya oligodinamik.
Cara Kerja :
1.Inokulasikan E.coli dan Bacillus sp. pada cawan NA dengan streak kontinyu
2.Letakan koin tembaga dan seng ke dalam cawan dengan pinset
3.Inkubasi 370C selama 48 jam
4.Hitung zona hambat yang terbentuk dengan mengukur diameter daerah yang
jernih atau tidak ada pertumbuhan
B.Pengertian dan Jenis Antibiotik

Antibiotik adalah bahan yang dihasilkan oleh mikroorganisme atau sintetis
yang dalam jumlah kecil mampu menekan menghambat atau membunuh
mikroorganisme lainnya. Antibiotik memiliki spektrum aktivitas antibiosis yang
beragam.
Antibiotik dikelompokkan berdasarkan gugus aktifnya, misal antibiotik
macrolide, antimikroba peptida. Adapun penamaannya biasanya berdasarkan gugus
kimiawinya ataupun mikroorganisma produsernya, misalnya:
v  ragam antibakteria:
- Penicillin dan cephalosporin
-Erythromycine
- Sulfa drugs
- Trimethoprim dan sulfamethoxazole
- Polymyxin B
- Quinolone
- Tetracycline
v  Antifungi :
- Nystatin
- Azoles
Mekanisme kerja antibiotik antara lain :
v  Menghambat dsintesis dinding sel
v  Merusak permeabilitas membran sel.
v  Menghambat sintesis RNA (proses transkripsi)
v  Menghambat sintesis protein (proses translasi).
v  Menghambat replikasi DNA.
Prosedur difusi-kertas cakram-agar yang distandardisasikan (metode Kirby-
Bauer) merupakan cara untuk menentukan sensitivitas antibiotik untuk bakteri.
Sensitivitas suatu bakteri terhadap antibiotik ditentukan oleh diameter zona hambat
yang terbentuk. Semakin besar diameternya maka semakin terhambat
pertumbuhannya, sehingga diperlukan standar acuan untuk menentukan apakah
bakteri itu resisten atau peka terhadap suatu antibiotik.
Faktor yang mempengaruhi metode Kirby-Bauer :
- Konsentrasi mikroba uji
- Konsentrasi antibiotik yang terdapat dalam cakram
- Jenis antibiotik.
- pH medium.
Cara kerja pengujian antibiotik dengan metode Kirby-Bauer :
1. Celupkan cotton bud (cotton swab) dalam biakan bakteri kemudian tekan kapas ke sisi tabung agar air tiris
2. Ulaskan pada seluruh permukaan cawan Mueller-Hinton Agar secara merata.
3. Biarkan cawan selama 5 menit.
4. Kertas cakram dicelupkan dalam larutan antibiotik dengan konsentrasi tertentu.
4. Angkat, biarkan sejenak agar tiris, selanjutnya letakkan kertas cakram pada
permukaan agar.
5. Kertas cakram ditekan menggunakan pinset supaya menempel sempurna di
permukaan agar.
6. Inkubasi pada suhu 37 0C selama 24-48 jam.
7. Ukur diameter zona hambat (mm) kemudian bandingkan dengan tabel.
sensitivitas antibiotik.
Cara menginterpretasikan :
Ukur diameter zona hambat (zona jernih)
Misal didapatkan zona hambat suatu bakteri berdiameter 26 mm untuk Eryhtromycin.
Maka interpretasinya adalah bakteri tersebut peka terhadap antibiotik Eryhtromycin.
Resistent : tahan
Intermediate : medium
Susceptible : peka
BAB V1

POTENSI ANTIBIOTIK

Bakteri, dari kata lain bacterium adalah kelompok raksasa dari organisme hidup. Mereka sangatlah kecil (mikroskopik) dan kebanyakan uniseluler (bersel tunggal), dengan struktur sel yang relative sederhana tanpa nucleus/inti sel, cytoskeleton, dan organelle lain seperti mitokondria dan kloroplas. Struktur sel mereka dijelaskan lebih lanjut dalam artikel mengenai prokaryota, karena bakteri merupakan prokaryota, untuk membedakan mereka dengan organisme yang memiliki sel lebih kompleks, disebut eukaryota. Istilah “bakteri” telah diterapkan untuk semua prokaryota atau untuk kelompok besar mereka, tergantung pada gagasan mengenai hubungan mereka.
Bakteri adalah yang paling berkelimpahan dari semua organisme. Mereka tersebar (berada dimana-mana) di tanah, air dan sebagai simbiosis dari organisme lain. Banyak patogen merupakan bakteri. Kebanyakan dari mereka kecil, biasanya hanya berukuran 0,5-5µm, meski sebuah jenis dapat menjangkau 0.3 mm dalam diameter (Thiomargarita) mereka umumnya memiliki dinding sel, seperti sel hewan dan jamur, tetapi dengan komposisi yang sangat berbeda (peptidoglycan). Banyak yang bergerak menggunakan flagella, yang berbeda dalam strukturnya dari flagella kelompok lain. Mikroorganisme, khususnya bakteri lebih kita kenal sebagai kuman penyebab penyakit. Sejak lama manusia mencoba berbagai cara untuk menanganinya. Mulai dari cara pengobatan dengan desinfektan dan antibiotik, sampai pada pemanfaatan makanan.
ANTIBIOTIK
Penemuan Alexander Fleming berupa antibiotik penisilin merupakan tonggak awal perlawanan terhadap bakteri. Penggunaan antibiotik sampai sekarang merupakan cara yang paling efektif untuk mengobati penyakit-penyakit yang disebabkan bakteri. Apabila diberi sesuai dosis yang diperlukan, daya kerjanya tidak hanya dapat menghentikan daya tumbuh bakteri, melainkan juga membasminya hingga tuntas.
Pada perkembangan selanjutnya penggunaan antibiotik ternyata memiliki dampak negatif  yang menghawatirkan. Penggunaan secara berlebihan yang tidak disrtai dengan ketepatan dalam pemberian resep, serta kesalahan pola pemakaian pada penderita penyakit telah menyebabkan resistensi bakteri terhadap antibiotik yang bersangkutan. Jika hal ini tidak segera diatasi, alih-alih menyembuhkan penyakit, antibiotik justru membuat kuman penyakit menjadi lebih kuat.
Pemberian antibiotik secara tidak tepat juga dapat menyebabkan efek samping secara langsung berupa kerusakan pada organ yang bisa menyebabkan kematian. Selain itu, bahan yang diberikan secara berlebihan juga dapat membunuh bakteri-bakteri baik yang diperlukan tubuh.
2.1 Pengertian Antibiotik
Antibiotik adlah obat yang membunuh atau memperlambat pertumbuhan bakteri. Antibiotik adlah salah satu ”Antimikroba”, yaitu kelompok obat yang mencakup antivirus, antijamur, dan antiparasit. Obat semacam ini tidak berbahaya bagi tubuh manusia, sehingga dapat digunakan sebagai mengobati infeksi. Istilah ini awalnya hanya digunakan untuk formulasi yang diperoleh dari makhluk hidup, tetapi sekarang antimikrobial buatan juga termasuk didalamnya, seperti sulfonamida.
Tidak seperti perawatan infeksi sebelumnya, yang menggunakan racun seperti striknin, antibiotik dijuluki ”peluru ajaib”: obat yang membidik penyakit tanpa melukai tuannya. Antibiotik tidak efektif menangani infeksi akibat virus, jamur, atau nonbakteri lainnya., dan individu antibiotik sangat beragam keefektifannya dalam melawan berbagai jenis bakteri. Ada antibiotik yang membidik bakteri gram negatif atau gram positif, ada pula yang sprektumnya lebih luas. Keefektifannya juga bergantung pada lokasi infeksi dan kemampuan antibiotik mencapai lokasi tersrbut. Antibiotik yang dimakan adalah pendekatan yang mudah jika efektif, dan antibiotikmelalui infus digunakan untuk kasus yang lebih serius. Antibiotik kadang kala dapat digunakan setempat, seperti tetes mata dan salep.
Antibiotik adalah segala macam bahan yang dihasilkan dan dikeluarkan suatu mikroorganisme yang dapat menghambat atau membunuh mikroorganisme lain. Bahannya merupakan racun spesifik yang dapat membunuh organisme saingan tanpa merusak sel-sel hidup disekitarnya. Masing-masing tipe antibiotik memberikan efek yang berbeda tarhadap bermacam jenis bakteri. Beberapa antibiotik membunuh bakteri dengan menghambat kemampuannya dalam mengubah glukosa menjadi energi, atau menghilangkan kemampuan bakteri untuk membentuk dinding sel. Apabila hal ini terjadi, maka bakteri tersebut tidak akan dapat berkembang biak dan kemudian mati.
Sebagian besar bahan antibiotik adalah produk alami. Meskipun antibiotik awal yaitu penisilin dihasilkan dari sejenis jamur, sekira 90% dari antibiotik yang digunakan sekarang diisolasi dari bakteri. Beberapa jenis dihasilkan dari bahan sintesis yang dibuat dengan teknik rekayasa dilaboratorium.
Selain penisilin dan turunannya, terdapat juga jenis-jenis antibiotik lain seperti streptomisin, tetrasiklin, dan lain-lain. Jenis yang paling banyak diresepkan dokter sekarang ini adalah jenis antibiotik Beta-laktam. Antibiotik ini dipilih karena tingkat selektivitasnya tinggi, mudah didapat, dengan analog sintesis yang tersedia dalam jumlah yang banyak.
Antibiotik adalah kelas obat-obatan yang digunakan dalam mengobati penyakit berjangkit yang disebabkan oleh kuman bacteria. Antibiotik bertindak dengan cara membunuh bacteria (Bakterisida) atau merencat pertumbuhan bacteria (Bakteriostatik) bagi membolehkan system ketahanan tubuh memusnahkannya.
Penemuan dan penciptaan antibiotik bermula pada tahun 1935 dianggap sebagai obat ajaib karena dapat membunuh bacteria dan seterusnya menyelamatkan penduduk dunia daripada kesengsaraan.
Hasil penemuan ini didapati berupaya mengurangkan kematian manusia akibat jangkitan penyakit yang pada abad 18 hingga 20 apabila seluruh dunia mengalami masalah penyakit berjangkit yang serius seperti penyakit kelamin, pneumonia, cirit-birit, meningitis, wabak bubonik , batuk kering, demam kuning, tifus dan taun yang telah membunuh jutaan manusia.
Setiap antibiotik hanya efektif untuk jenis infeksi tertentu. Misalnya untuk pasien yang didiagnosa menderita radang paru-paru, maka dipilih antibiotik yang dapat membunuh bakteri penyebab radang paru-paru ini. Keefektifan masing-masing antibiotik bervariasi tergantung pada lokasi infeksi dan kemampuan antibiotik mencapai lokasi tersebut.
Antibiotik oral adalah cara yang paling mudah dan efektif, dibandingkan dengan antibiotik intravena (suntikan melalui pembuluh darah) yang biasanya diberikan untuk kasus yang lebih serius. Beberapa antibiotik juga dipakai secara topikal seperti dalam bentuk salep, krim, tetes mata dan tetes telinga.
Penentuan jenis bakteri patogen ditentukan dengan pemeriksaan laboratorium. Teknik khusus seperti pewarnaan gram cukup membantu mempersempit jenis bakteri penyebab infeksi. Spesies bakteri tertentu akan berwarna dengan pewarnaan gram, sementara bakteri lainnya tidak. Teknik kultur bakteri juga dapat dilakukan dengan cara menganbil bakteri dari infeksi pasien dan kemudian dibiarkan tumbuh. Dari cara ini bakteri tumbuh dan penampakannya dapat membantu mengidentifikasi spesies bakteri. Dengan kultur bakteri, sensivitas antibiotik juga dapat diuji.
Penting bagi pasien atau keluarganya untuk mempelajari pemakaian antibiotik yang benar, seperti aturan dan jangka waktu pemakaian. Aturan pakai mencakup dosis obat, jarak waktu antar pemakaian, kondisi lambung (berisi atau kosong) dan interaksi dengan makanan dan obat lain. Pemakaian yang kurang tepat akan mempengaruhi penyerapannya, yang pada akhirnya akan mengurangi atau menghilangkan keefektifannya.
Bila pemakaian antibiotik dibarengi dengan obat lain, yang perlu diperhatikan adalah interaksi obat, baik dengan obat bebas maupun obat yang diresepkan dokter. Sebagai contoh: Biaxin ( klaritomisin, antibiotik) seharusnya tidak dipakai bersama-sama dengan Theo-Dur (teofin, obat asma). Berikan informasi kepada dokter dan apoteker tentang semua obat-obatan yang sedang dipakai sewaktu menerima pengobatan dengan antibiotik.
Jangka waktu pemakaian antibiotik adalah satu periode yang ditetapkan dokter. Sekalipun sudah merasa sembuh sebelum antibiotik yang diberikan habis, pemakaian antibiotik seharusnya dituntaskan dalam satu periode pengobatan. Bila pemakaian antibiotik terhenti ditengah jalan, maka mungkin tidak seluruh bakteri mati, sehingga menyebabkan bakteri resistan terhadap antibiotik tersebut. Hal ini dapat menimbulkan masalah serius bila bakteri yang resistan berkembang sehingga menyebabkan infeksi ulang.
2.2 JENIS-JENIS ANTIBIOTIK
1.Penisilin
Antibiotik moderen yang pertama, dan yang masih tergolong diantara yang masih bermanfaat serta yang paling luas penggunaanya , ialah penisilin. Penisilin merupakan suatu kelompok persenyawaan dengan struktur yang sekerabat dan sifat-sifat serta aktifitas yang agak berbeda . semua penisilin mempunyai inti yang sama yaitu cincin β-laktam-thiazolidin: yang justru memberikan sifat unik pada masing-masing penisilin ialah rantai sampingnyayang berbeda-beda. Secara kimiawi penisilin di golongkan kedalam antibiotik β-laktam.
Cara kerja:Penisilin menghambat pembentukan dinding sel bakteri dengan cara mencegah digabungkannya asam N-assetilmuramat, yang dibentuk dalam sel bakteri. Mekanisme kerja ini konsisten dengan kenyataan bahwa penisilin hanya bekerja pada bakteri yang sedang tumbuh dengan aktif. Sel-sel bakteri yang ditumbuhkan dengan adanya antibiotik ini akan menjadi luar biasa besar ukurannya serta memiliki bentuk yang tak umum. Basilus yang dikenai penisilin membentuk tonjolan-tonjolan pada dinding selnya sehingga sitoplasma mengalir kedalamnya. Sel kehilangan sitoplasmanya karena lisis dan tertinggalah membran sitoplasma yang kosong sebagai ”hantu”.
2.Sefalosforin
Sefalosforin merupakan sekelompok antibiotik yang dihasilkan oleh suatu spesies cendawan laut, Chefalosforium acremonium. Kelompok kimiawinya sama seperti penisilin, yaitu β-laktam. Sejumlah besar sefalosforium semi sintetis sudah dapat dibuat dan beberapa diantaranya bernilai kemoterapeutik. Aktif terhadap banyak bakteri gram positif dan gram negatif. Tidak dirusak oleh penisilinase, dam beberapa diantaranya stabil pada pH asam.
Cara kerja : seperti halnya penisilin sefalosforin juga melancarkan fek antibakterialnya dengan cara menghambat sintetis tinggi sel bakteri. Sefalosforin bersifat baktrisid.
Streptomisin
Streptomisin dihasilkan oleh streptomyces griceus, suatu bakteri tanah yang diisolasi oleh Waksman dan rekan-rekannya, yang melaporkan aktifitas antibiotik pada tahun 1994. Yang terutama penting ialah penemuan mengenai aktifitas terhadap bacilus TBC, streptomisin kemudian menjadi antibiotik utama untuk kemoterapi tuberculosis. Streptomisin efektif untuk banyak bakteri gram positf dan gram negatif.
3.Inhibitor sintesis dinding sel bakteri, mencakup golongan Penicillin, Polypeptide dan Cephalosporin, misalnya ampicillin, penicillin G.
4.Inhibitor transkripsi dan replikasi, mencakup golongan Quinolone, misalnya rifampicin, actinomycin D, nalidixic acid.
5.Inhibitor sintesis protein, mencakup banyak jenis antibiotik, terutama dari golongan Macrolide, Aminoglycoside, dan Tetracycline, misalnya gentamycin, chloramphenicol, kanamycin, streptomycin, tetracycline, oxytetracycline;
6.Inhibitor fungsi membran sel, misalnya ionomycin, valinomycin.
7.Inhibitor fungsi sel lainnya, seperti golongan sulfa atau sulfonamida, misalnya oligomycin, tunicamycin; dan
8.Antimetabolit, misalnya azaserine.
2.3 MEKANISME RESISTENSI MIKROBA
Mekanisme terjadinya resistensi terhadap senyawa antimikroba antara lain :
1)Mikroba mensintesis ensim yang dapat mengubah zat aktif menjadi tidak aktif.
2)Terjadinya perubahan pada tempt yang peka terhadap anti mikroba.
3)Hilangnya permeabilitas sel terhadap antimikroba.
4)Meningkatnya konsentrasi metabolit yang antagonis kompetitif dengan penghambat.
5)Mikroba membuat jalan metabolisme baru.
Contoh resistensi yang terjadi akibat mikroba mensintesis ensim yaitu resistensi mikroba terhadap penisilin.Organisme tersebut menghasilkan ensim penisilinase yang mampu memecah cincin beta-laktam penisilin menjadi penicilloic acid yang tidak aktif. Demikian pula sefalosporin juga didegradasi oleh beta-laktamase. Banyak bakteri
yang mampu memproduksi beta laktamase, meliputi bakteri gram positip dan negativ.
Ensim ini mempunyai peranan besardalam menyebabkan resistensi bakteri gram positif terhadap penisilin dan sefalosporin.Fisiologi produksi beta-laktamase kebanyakan bakteri gram negatif berbeda dari bakteri gram positif.Bakteri gram negatif umumnya menghaslkan beta-laktamase lebih sedikit dibanding gram positif dalam keadaan diinduksi, kecuali Enterobacter dan Proteus yang mempunyai beta laktamase inducible sehingga dapat memproduksi ensim cukup banyak. Pada gram negatif umumnya ensim ini terikat sel dan tidak dilepas ke lingkungan sekitarnya. Pada organisme gram positif, beta laktamase merupakan ensim inducible. Dengan adanya penisilin atau sefalosporin,
produksinya meningkat. Biasanya pada bakteri gram positif, ensim ini dilepas dari sel dan merusak antibiotik yang ada di sekitarnya. Saat ini telah banyak dikembangkan derivat penisilin yang mempunyai rantai samping berbeda dan mampu menghambat pertumbuhan bakteri penghasil beta laktamase yang resisten ter-hadap benzil penisilin, misalnya methicillin dan carbenicillin. Terhadap S. aureus yang tidak memproduksi beta laktamase, methicillin kurang aktif dibanding benzil penisilin, tetapi aktif terhadap penghasil beta laktamase. Oleh karena itu antibiotik ini berguna melawan infeksi yangdisebabkan bakteri gram positip.
Cermin Dunia Kedokteran No. 74, 1992 48
Carbenicillin sedikit aktif terhadap bakteri gram positip, aktivitasnya meningkat terhadap gram negatif, terutama berguna melawan Pseudomonas. Resistensi beberapa strain bakteri gram positip dan negatip terhadap kloramphenikol juga terjadi, karena asetilasi menjadi senyawa tidak aktif. Strain resisten ini memproduksi kloram-phenikol asetiltransferase yang merupakan ensim inducible pada S. aureus. Resistensi beberapa bakteri gram negatip terhadap berbagai aminoglikosida juga karena inaktivasi secara ensimatis yaitu fosforilasi, adenilasi dan asetilasi. Fosforilasi terjadi pada streptomisin oleh ensim streptomisin phospotransferase. Ensim ini hanya bekerja pada streptomisin. Neomisin, kanamisin dan paromomisin mengalami phosporilasi dengan adanya ensim
neomisin-kanamisin phospotransferase. Adenilasi juga dapat erjadi pada streptomisin, menjadi derivat adenil oleh ensim streptomisin-spektinomisin adeniltransferase. Ensim gentamisin adeniltransferase dapat merubah gentamisin c, kanamisin dan tobramisin menjadi derivat adenil.Asetilasi, misalnya ensim kanamisin asetiltransferase mengasetilasi kanamisin, juga neo-misin, gentamisin atau aminoglikosida lain.
Perubahan pada tempat yang peka terhadap antimikroba, juga dapat menyebabkan resistensi mikroba. Contoh mekanisme ini yaitu hilangnya kepekaan ribosom terhadap streptomisin. Disini terjadi perubahan komponen ribosom subunit 30 s, sehingga streptomisin tidak dapat berikatan dalam waktu lama dan akibat-nya antibiotik ini tidak dapat mempengaruhi biosintesis protein. Padahal kegiatan antibiotik ini mempengaruhi biosintesis pro-tein pada sel yang peka. Contoh lain yaitu resistensi terhadap eritromisin yang terjadi karenaperubahan protein ribosom subunit 50 s pada S. aureus. Hilangnya permeabilitas sel terhadap antibiotik, diduga juga merupakan salah saw cara terbentuknya mikroba resisten. Jika sel menjadi tidakpermeabel, makaantibiotik tidakdapatmenem-bus ke dalam set. Untuk itu perlu tipe antibiotik bar’ yang dapat mempenetrasi sel dengan cara lain misalnya dengan difusi. Permeabilitas sel berubah karena beberapa hal antara lain sintesis barter permeabilitas dan perubahan mekanisme transport. Bakteri gram negatif relatip lebih resisten dibandingkan gram positif terhadap antibiotik tertentu, mungkin disebabkan oleh barier permeabilitas yaitu adanya lapisan lipoprotein dan lipo-
polisakarida pada gram negatip. Sebagai contoh, mutan E. coil telah meningkatkan resistensinya terhadap ampisilin dan berkait-an dengan perubahan polisakarida. Beberapa pneumokoki resisten terhadap streptomisin dan eritromisin mungkin juga karena mengembangkan barier permeabilitasnya.Perubahan mekanisme transport antibiotikmungkin juga menyebabkan hitangnya permeabilitas sel terhadap antibiotik. Antibiotik memasuki sel dengan mekanisme transport spesifik. Pada beberapa set resisten, antimilroba gagal memasuki sel karena ada perubahan beberapa komponen yang menyebabkan hilangnya fungsi transport. Misalnya pada mutan E. coil yang resisten terhadap D-sikloserin; path sel yang peka, akumulasi antibiotik ini terjadi dengan sistem transport yang secara normal membawa D-alanin atau glisin. Pada mutan, fungsi transport ini berkurang dan resistensi terhadap sikloserin meningkat. Resistensi dapat terjadi dengan cara meningkatkan sintesis metabolis yang antagonis kompetitip terhadap antimikroba. Bila senyawa antimikroba menghambat pertumbuhan dengan cara antagonis kompetitip terhadapmetabolit normal, makaresistensiterhadap antimikroba ini mungkin karena meningkatnya produksi metabolit tersebut. Secara kompetitip antimikroba di-
gantikan dari tempat ikatannya. Sebagai contoh mutan resisten terhadap sulphonamid. Pada sel ini konsentrasi para aminobenzoic acid lebih tinggi daripada sel yang peka terhadap sulphonamid. Dengan cara ini mikroorganisme resisten dapat mempertahankan metabolismenya bagi kelangsungan hidupnya. Di samping itu, dalam mempertahankan kelangsungan hidupnya, mikroba dapat membuat jalan metabolisme baru atau lain, untuk menghindari penghambatan antimikroba terhadap jalan metabolisme yang normal, misalnya reaksi barn pada meta-bolisme nukleotida purin dan pirimidin. Reaksi ini terjadi karena mikroorganisme tersebut menghindari metabolisme normal yang dihambat oleh antimikroba. Sebagai contoh mutan E. coli resisten dapat membentuk jalan metabolisme baru dalam mensintesis THFA (asam tetrahidrofolat) karena adanya sulfatiazol. Telah banyak diketahui banyak cara mikroorganisme mela-wan efek toksik substansi penghambat pertumbuhan, dengan perubahan genetika dan biokimia. Selain perubahan tersebut, mekanisme resistensi terhadap antimikroba mungkin telah berkembang sebelum zat ini digunakan oleh manusia di bidang medis, veteriner atau pertanian. Jadi ada perbedaan antara resis-tensi bakteri yang diperoleh sesudah penggunaan antimikroba (acquired) dan mikroba yang secara alamiah sudah resisten se-belum antimikroba tersebut digunakan (inherent). Sebagai con-toh bakteri gram negatip Pseudomonas aeruginosa; ia secara alami relatip lebih resisten terhadap kebanyakan antibiotik. Resistensi inheren bakteri ini mungkin berkaitan dengan impemeabilitas lapisan luarsel terhadapantimikroba, sehinggamampu mencegah tercapainya konsentrasi penghambatan di dalam sel. Fleksibilitas. dan kemampuan populasi bakteri beradaptasi terhadap toksisitas antimikroba dapat menimbulkan masalah resistensi. Bila antimikroba barn digunakan melawan bakteri penyebab infeksi yang tidak memperlihatkan resistensi inheren,maka setelah beberapa tahun penggunaan, bakteri tersebut mungkin menjadi resisten atau memerlukan konsentrasi lebih besar untuk membinasakannya. Namun resistensi acquired kadang-kadang tidak muncul; misalnya Streptococcus haemolyticus
masih peka terhadap benzil penisilin sesudah penggunaan 30 tahun. Resistensi munculnya kadang-kadang sangat lambat. Memang munculnya organisme resisten dan laju penyebarannya biasanya sukar diramal.



2.4 EFEK SAMPING
Disamping banyaknya manfaat yang dapat diperoleh dalam pengobatan infeksi, antibiotik juga memiliki efek samping pemakaian, walaupun pasien tidak selalu mengalami efek samping ini. Efek samping yang umum adalah sakit kepala ringan, diare ringan dan mual. Dokter perlu diberi tahu bila terjadi efek samping seprti muntah, diare hebat dan kejang perut, reaksi alergi (seperti sesak nafas, gatal dan bilur merah pada kulit, pembengkakan pada bibir, muka atau lidah, hilang kesadaran), bercak putih pada lidah, gatal dan bilur merah pada vagina.

















BAB VII


ANTIMIKROBIAL


Bahan kimia yang digunakan dalam pengobatan ( Kemoterapeutik ) menjadi pilihan bila dapat mematikan bukan hanya menghambat pertumbuhan mikroorganeisme. BAhan kimia yang mematikan bakteri disebut bakterisidal, sedangkan bahan kimia yang menghambat pertumbuhan bakteri disebut bakteriosidal. Bahan antimicrobial dapat bersifat bakteriostatik pada konsentrasi rendah, namun bersifat bakterisidal dalam konsentrasi tinggi.
Bahan kemoterapeutik yang baik mempunyai daya yang mematikan mikroorganisme, namun tidak menyebabkan keracunan pada induk.
Faktor-faktor yang mempengaruhi penghambatan mikroorganisme yaitu :

• Kepekaan populasi mikroorganisme
• Kepekaan terhadap antimicrobial
• Volume bahan yang disterilkan
• Lamanya bahan antimicrobial diaplikasikan terhadap mikroorganisme
• Konsentrasi bahan antimicrobial
• Suhu dan kandungan bahan organic

( Bibiana, 1995.hal.67-68 )
Pertumbuhan mikroorganisme dapat dikendalikan melalui proses fisika dan kimia. Pengendalian ini dapat dilakukan dengan pembasmian atau pembunuhan dan penghambatan mikroorganisme. Dapat menghambat bila pada konsentrasi rendah dan dapat mematikan bila konsentrasi tinggi.
2.1 Pengertian antimicrobial
Menurut pelezar dan chan ( 1998 ), zat antimicrobial adalah zat yang dapat mengganggu pertumbuhan dan metabolisme melalui mekanisme penghambatan pertumbuhan mikroorganisme. Zat antimicrobial adalah zat yang dapat mengganggu pertumbuhan dan metabolism melalui penghambatan pertumbuhan bakteri. ( Boyd and Marr.1980:Pelezar,1998 )
Beberapa hal yang perlu diperhatikan dalam memilih zat  antimicrobial kimiawi adalah :

1. Jenis zat dan mikroorganisme

Zat antimicrobial yang akan digunakan harus sesuai dengan jenis mikroorganismenya karena memiliki kerentetan yang berbeda-beda

1. Konsentrasi dan antensitas zat antimicrobial

Semakin tinngi zat antimicrobial yang digunakan, maka semakin tinggi pula daya kemampuan dalam mengendalikan mikroorganisme.

1. Jumlah Organisme

Semakin banyak mikroorganisme yang dihambat atau dibunuh, maka semakin lama waktu yang diperlukan untuk mengendalikannya.

1. Suhu

Suhu yang optimal dapat menaikan efektifitas zat antimicrobial.

1. Bahan Organik

Bahan organic dapat menurunkan efektifitas zat antimicrobial dengan cara menginaktifkan bahan tersebut atau melindungi mikroorganisme. Hal ini karena penggabungan zat dan bahan organic asing membentuk zat antimicrobial yang berupa endapan sehingga zat antimicrobial tidak lagi mengikat mikroorganisme. Akumulasi bahan organic terjadi pada permukaan sel mikroorganisme sehingga menjadi pelindung yang mengganggu kontak antara zat antimicrobial dengan mikroorganisme lain.
(Pelezar,1998)
Contohnya protein akan mengurangi daya kerja desinfektan, sedangkan panas akan mempercepat daya kerjanya.
Untuk membandingkan kekuatan desinfektan dalam menghambat pertumbuhan bakteri dapat digunakan cakram kertas.Caranya:

1. Cakram kertas dengan diameter tertentu dibasahi dengan desinfektan.
2. Letakan cakram kertas tadi pada lempengan agar yang telah diinokulasi.
3. Lempengan agar ini kemudian diinkubasi selama 2×24 jam.

Jika desinfektan menghambat pertumbuhan bakteri, maka terlihat daerah atau zona bening atau jernih atau babas mikroba disekeliling cakram kertas. Luas daerah jernih inilah yang menjadi ukuran kekuatan daya kerja desinfektan.

2.2 Pengertian Antibiotik
Antibiotik adalah obat yang membunuh atau memperlambat pertumbuhan bakteri. Antibiotik adalah salah satu kelas “ Antimikrobial ” , yaitu kelompok obat yangmencangkup termasuk obat antivirus,anti jamur, dan antiparasi. Obat semacam ini tidak berbahaya bagi tubuh manusia, sehingga dapat digunakan sebagai mengobati infeksi. Istilah ini awalnya hanya digunakan untuk formulasi yang diperoleh dari makhluk hidup, tetapi sekarang antimikroba buatan juga termasuk didalamnya, seperti sulfonamide.
Tidak seperti perawatan infeksi sebelumnya yang menggunakan racun seperti Striknin, antibiotic dijuluki “ Peluru Ajaib “ obat yang membidik penyakit tanpa melukai tuannya. Antibiotik tidak efektif menangani infeksi akibat virus, jamur, atau non bakteri lainnya.
2.3 Bahan-bahan yang termasuk Antimikrobial

1. Buah Paria

Buah paria atau pare ( Momordica Chordatia ) berbentuk lonjok seperti mentimun yang dipenuhi “ kutil “ ( bergelombang ). Rasanya pahit dan setelah dimasak buahnya menjadi manis, tapi sayang sudah tak dapat dimasak lagi karena empuk. Meskipun paria banyak disenangi banyak orang, paria dapat memperlancar peredaran darah. Buah paria dapat mengobati cacing kremi dan juga obat demam.

1. Daun Edi

Kata orang-orang dahulu dapat mengobati gatal-gatal.
2.4 Oligodinamik
Beberapa logam berat pada konsentrasi rendah memiliki kemampuan untuk mematikan bakteri. Kemampuan ini disebut daya oligodinamik. Oligodinamik adalah logam-logam yang memiliki kemampuan untuk menghambat pertumbuhan atau membunuh bakteri. Pengikatan logam berat oleh sel bakteri disebabkan oleh afinitas protein yang tinggi, pengaruh akumulasi ion logam menyebabkan kematian sel bakteri.
Contoh oligodinamik yaitu :

• Logam-logam alkali
• Alkali tanah
• Mangan

BAB VIII

KOEFISIEN FENOL
Keampuhan bahan antimkrobial sering kali dibandingkan dengan fenol. Fenol sering digunakan untuk mematikan mikroorganisme. Koefisien fenol adalah bilangan pecahan yang menunujukkan perbandingan kekuatan daya bunuh dari desinfektan dibandingkan dengan kekuatan daya bunuh dari fenol sebagai pembanding dalam kondisi yang sama, yaitu jenis bakteri yang sama dan waktu kontak yang sama.
Koefisien fenol kurang dari satu, berarti bahwa bahan antimicrobial tersebut kurang efektif disbanding fenol. Koefisien lebih dari satu, berarti bahwa bahan antimicrobial tersebut lebih efektif daripada fenol. Waktu untuk menguji antibiotika adalah 18-24 jam,sedangkan untuk mata tidak mungkin selama itu.Oleh karena itu ,digunakan waktu tertentu dengan metode kontak secara konvensional,waktu nyang paling cepatn adalah 2,5 menit paling lama 15 menit.Kekuatan fenol untuk menguji desinfektan adalah tidak lebih dari 5%.
Koefisien fenol ditentukan dengan cara membagi pengenceran tertinggi dari sample yang mematikan mikroorganisme dalam 10 menit tetapi tidak mematikanya dalam 5 menit(misalnya pada pengenceran 1:350) terhadap pengenceran tertinggi fenol yang mematikan dalam waktu 10 menit tetapi tidak mematikan dalam waktu 5 menit (misalnya 1:90).Koefisien dari bahan antimicrobial tersebut adalah 350:90=3,9.
2.1 Mikroba Uji
Untuk penentuan koefisien fenol dapat digunakan berbagai bacteria seperti :

• Salmonella typhi

Untuk Salmonella typhi, stok biakan dilakukan dalam NA miring, transfer 1 bulan sekali, inkubasi 2 hari pada 37 C kemudian disimpan pada suhu 2-5 C. Bila akan digunakan, harus dilakukan inokulasi dalam Nutrient Broth, inkubasi dalam 22-26 jam pada suhu 37 C dan ditransfer harian 4 hari berturut-turut, tetapi tidak lebih dari 30 kali.

• Psedomonas aeruginosa

Untuk Psedomonas aeruginosa transfer harian tidak lebih dari 25 kali. Untuk penetapan (tes) digunakan biakan dalam Nutrient Broth hasil inkubasi 22-26 jam pada suhu 37 C.

• Staphilococus aureus

2.2 Ciri-ciri desinfektan yang ideal adalah :

• Aktivitas antimicrobial pada konsentrasi rendah, harus mempunyai aktivitas spektrum luas.
• Pelarutan harus dapat larut dalam air atau pelarut lain sampai taraf yang diperlukan untuk dapat digunakan secara efektif.
• Stabilitas, perubahan yang terjadi pada substansi bila dibiarkan beberapa hari harus seminimal mungkin dan tidak boleh menghilangkan sifat antimikrobanya secara nyata.
• Tidak bersifat racun.
• Homogen.
• Tidak tergabung dengan bahan organic.
• Aktifitas antimicrobial pada suhu kamar.
• Tidak menimbulkan karat dan warna.
• Kemampuan menghilangkan bau yang kurang sedap.
• Memiliki kemampuan sebagai deterjen dari pembersih.
• Tersedia dalam jumlah yang besar dan harga yang pantas.

(Pelezar,1998)
2.3 Kelompok-kelompok utama bahan antimicrobial kimiawi adalah :

• Fenol dan persenyawaan fenolat
• Alkohol
• Halogen
• Logam berat dan persenyawaannya
• Detergen
• Aldehid
• Kemosterilisator gas

2.3.1 Fenol dan persenyawaan fenolat
Fenol (asam karbolat), yang digunakan untuk pertama kalinya untuk Lister sekitar tahun 1860-an di dalam pekerjaannnya untuk mengembangkan teknik-teknik pembedahan aseptic, telah lama merupakan standar pembanding bagi desinfektan lain untuk mengevaluasi aktivitas bakterisidalnya. Pada masa kini telah tersedia banyak desinfektan lain yang jauh lebih efektif dan aktif pada konsentrasi yang lebih rendah. Persenyawaan-persenyawaan ini boleh jadi bekerja terutama dengan cara mendenaturasikan protein sel dan merusak membrane sel. Kresol beberapa kali lebih germisidal dibandinngkan dengan fenol;o-fenilfenol dan persenyawaan-persenyawaan fenolat lain dengan derajat substitusi yang tinggi ternyata lebih efektif pada pengenceran yang tinggi.
Persenyawaan fenolat dapat bersifat bakterisidal atau bakteriostatik bergantung kepada konsenntrasi yang digunakan. Spora bakteri dan virus lebih resisten terhadap persenyawaan tersebut dibandingkan dengan sel vegetative bakteri. Beberapa persenyawan fenolat bersifat sangat fungsidal. pH alkalin dan bahan organic dapat mengurangi aktivitas antimicrobial fenolat. Suhu rendah dan sabun juga akan mengurangi aktivitas antimicrobial fenolat. Senyawa-senyawa fenolat merupakan salah satu desinfektan permukaan yang terbaik bagi benda-benda mati.
2.3.2 Persenyawaan alcohol
Etil alcohol dengan konsentrasi 50-70 % efektif terhadap mikroorganisme vegetative atau yang tidak membentuk spora. Etil alcohol mempunyai aktivitas sporisidal yang rendah. Di dalam bukunya Disinfection and Sterilitation, G.Sykes mencatat bahwa spora antraks dapat bertahan didalam alcohol selama 20 tahun sedangkan spora Bacillus Subtilis selama 9 tahun.
Metil alcohol kurang bakterisida dibandingkan dengan etil alkohol. Senyawa ini sangat beracun, bahkan uap dari persenyawaan ini dapat mengakibatkan kerusakan permanen pada mata, sehingga pada umumnya tidak digunakan sebagai desinfektan. Alkohol dengan rantai karbon lebih panjang seperti propel, buthil, amil,dll bersifat germisidal. Tetapi alcohol yang berat molekulnya lebih tinggi daripada propel alcohol tidak bercampur sempurna dengan air, sehingga tidak umum digunakan sebagai desinfektan. Propil dan isopropyl alcohol dengan konsentrasi yang berkisar antara 40-80% berguna sebagai desinfektan kulit. Beberapa zat lain seperti iodium dan gliserol telah dicampur dengan alcohol, beberapa diantaranya mempunyai efesiensi antibacterial yang lebih baik.
Alkohol efektif untuk mengurangi flora mikroba pada kulit dan untuk desinfektan thermometer oral. Alkohol dengan konsentrasi diatas 60% efektif terhadap virus, tetapi keefektifannya sangat terpengaruhi oleh jumlah bahan protein asin didalam campuran. Protein asin itu bereaksi dengan alcohol. Disamping itu alcohol juga merupakan pelarut lipid sehingga dapat merusak membrane sel.
2.3.3 Halogen serta persenyawaannya
Keluarga halogen beranggotakan unsure-unsur flor,clor,brom dan iodium ialah yang paling luas penggunaannya sebagai zat antimicrobial.
Iodium.
Zat ini merupakan salah satu bahan germisidal yang paling tua serta paling efektif, iodium telah digunakan lebih dari 1 abad karena telah tercatat dalam united stated pharmacopeia sejak tahun 1830. Kelarutan iodium murni dalam air kecil sekali tetapi zat ini akan segera larut dalam alcohol dan larutan kalium atau natrium iodide. Secara tradisional, iodium digunakan sebagai bahan germisidal dalam bentuk yang dikenal sebagai iodium tinktur yang merupakan campuran 2% iodium dan 2% natrium iodine didalam 50% alcohol. Iodium juga digunakan dalam bentuk iodoform, yaitu campuran iodium dengan zat aktif permukaan yang bekerja sebagai pembawa dan pelarut iodium.
Iodium merupakan zat yang sangat efektif dan unik yaitu efektif terhadap segala macam bakteri, spora, cendawan dan virus larutan iodium terutama digunakan untuk mengidentifikasi kulit, khususnya sebagai desinfektan kulit sebelum oprasi.
Clor dan persenyawaannya
Clor sebagai gas ataupun dalam kombinasi kimiawi merupakan salah satu desinfektan yang paling luas penggunaannya. Gas yang dimampatkan dalam bentuk cair digunakan hamper secara universal untuk memurnikan cadangan air kotamadya.
Gas clor ditangani lagi berbahaya kecuali bila ada peralatan khusus untuk menyalurkannya.
Tersedia banyak persenyawaan clor lebih mudah digunakan daripada gas clor dan bila digunakan dengan baik, sama efektifnya sebagai desinfektan.
2.3.4 Logam Berat serta persenyawaannya
Sebagian besar logam berat baik dalam bentuk unsure maupun bentuk persenyawaannya bersifat merugikan bagi mikroorganisme. Yang paling efektif ialah Merkuri, Perak, Tembaga. Persenyawaan logam berat banyak sekali memiliki aktivitas germisidal atau antiseptic. Persenyawaan logam berat antimicrobial yang paling penting adalah yang mengandung Merkuri, Perak dan Tembaga.
Salah satu cara kerja logam berat dan persenyawaannya ialah mendenaturasikan protein. Dalam hal Merkuri klorid, penghambatan diarahkan pada enzim-enzim yang mengandung gugusan sulfihidril.
2.3.5 Detergen
Zat pengurang tegangan permukaan atau zat pembasah yang terutama digunakan untuk membersihkan permukaan benda disebut detergen. Salah satu contohnya ialah sabun tetapi sabun tidak dapat bekerja dengan baik dalam air sadah. Sehingga mengembangkan pembersih baru seperti surfaktan atau detergen sintesis.
Beberapa jenis sabun dan detergen bersifat bakterisidal.
Secara kimiawi, detergen diklasifikasikan sbb :

• Detergen anionic yaitu detergen yang berionisasi dan sifat detergennya terletak pada anion
• Detergen kationik yaitu detergen yang berionisasi dan sifat detergennya terletak pada kation

2.3.6 Aldehid
Blutaraldehid dan Formaldehid merupakan dua persenyawaan aldehid yang mempunyai berbagai penerapan untuk mengendalikan populasi mikroorganisme.
Larutan Blutaraldehid 2% memperlihatkan aktivitas antimicrobial berspektrum luas. Digunakan untuk mensterilkan peralatan eurologis, alat-alat   berlensa dan perlengkapan medis yang lain. Formaldehid berbentuk gas yang stabil hanya pada konsentrasi tinggi dan suhu yang tinggi pula. Formaldehid juga diperdagangkan dalam bentuk larutan bernama formalin, yang mengandung 37-40% Formaldehid. Ciri buruk Formaldehid ialah menyebabkan iritasi pada kulit dan uapnya berbahaya.
2.3.7 Kemolistrelisator gas
Pada masa kini dengan berbagai macam produk yang dibuat dari bahan yang tidak dapat disterilkan dengan suhu tinggi atau kemosterilisator cairan. Sterilisasi kimiawi dengan menggunakan gas merupakan cara yang efektif serta praktis untuk bahan-bahan. Dalam proses ini, bahan itu dikenai gas didalam suatu ruangan tertutup pada suhu kamar. Setelah perlakuan, gas tersebut dapat dengan mudah dikeluarkan atau dihilangkan. Bahan plastic yang peka terhadap panas, seperti alat suntik, tabung reaksi, cawan petri dan pipet serta ruangan tertutup dapat disterilkan dengan gas. Zat utama yang belakangan ini digunakan untuk sterilisasi dengan gas ialah etienoksid.










KESIMPULAN
Metode penentuan angka lempeng total ini digunakan untuk menentukan jumlah total mikroorganisma aerob dan anaerob (psikrofilik, mesofilik dan termoflik) pada produk  perikanan.
Metode MPN (Most Probable Number) untuk uji kualitas mikrobiologi air dalam praktikum digunakan kelompok Coliform sebagai indikator.
Dalam uji bonterey terdapat uji metal merah, uji indol, uji voges proskauer, uji penggunaan sitrat, uji litmus susu, uji reduksi nitrat, uji hidrolisa gelatin, uji katalase, uji oksidase, uji hidrolisa lemak, uji hidrolisa pati, uji fermentasi karbohidrat, uji H₂S, uji motilitas.
Koefosien fenol adalah bilangan pecahan yang menunjukan perbandingan kekuatan daya bunuh dari desinfektan dibandingkan dengan kekuatan daya bunuh dari fenol sebagai pembanding dalam kondisis yang sama, yaitu jenis bakteri yang sama dan waktu kontak yang sama.
Zat antimicrobial adalah zat yang dapat mengganggu pertumbuhan dan metabolism mekanisme penghambatan pertumbuhan mikroorganisme.
Oligodinamik adalah logam-logam yang memiliki kemampuan untuk menghambat pertumbuhan atau membunuh bakteri.
MKC (minimum killing concentration) adalah konsentrasi minimal untuk membunuh mikroba.
MIC (minimum inhibitory concentration) adlah kemampuan minimal konsentrasi untuk menghambat pertumbuhan mikroba.








DAFTAR PUSTAKA

Sastro Utomo, Sutikno S.1992 .dasar-dasar Peptisida dan Dampak       Penggunaanya.jakarta:Gramedia Pustaka Utama.
W.Lay.Bibiana .1994.Analisis Mikroba di Laboratorium.jakarta:PT .Raja Grafindo Persada.
Pelczar, M. J & E. C. S Chan. 1986. Dasar-dasar Mikrobiologi. UI-Press, Jakarta.
Buckle, K. A., dkk. 1987. Ilmu Pangan. Diterjemahkan oleh Adiono dan Hari Purnomo. UI Press, Jakarta.
Hadioetomo, R. S. 1993. Mikrobiologi Dasar Dalam Praktek: Teknik dan Prosedur Dasar Laboratorium. PT Gramedia Pustaka Utama, Jakarta.
Fardiaz, S. 1993. Analisis Mikrobiologi Pangan. PT. Raja Grafindo Persada., Jakarta.
http://rachdie.blogsome.com/2006/11/02/teknik-dasar-analisa-mikrobiologi-2/
http://www.bsn.or.id/files/sni/SNI%2001-2332.3-2006.pdf
Cappuccino, J. G. & Natalie S. 1983. Microbiology A Laboratory Manual. Addison-Wesley Publishing Company, New York.